科學(xué)家將外源目的基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進(jìn)行重組,并在大腸桿菌中成功表達(dá)。下圖表示構(gòu)建重組質(zhì)粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請據(jù)圖回答:

(1)步驟①和②中常用的工具酶是                            。
(2)經(jīng)過①和②步驟后,有些質(zhì)粒上的                基因內(nèi)插入了外源目的基因,形成重組質(zhì)粒。
(3)步驟③是                                 的過程。
(4)步驟④:將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基C上培養(yǎng),目的是篩選     。
(5)步驟⑤:用無菌牙簽挑取C上的單個(gè)菌落,分別接種到D(含氨芐青霉素和四環(huán)素)和E(含四環(huán)素)兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上,一段時(shí)間后,菌落的生長狀況如圖所示。含目的基因的菌落位于(選填“D”或“E”)      上。
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