圖甲、乙中的箭頭表示三種限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，ampr表示氨芐青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列敘述正確的是(??? )

A．圖甲中的質(zhì)粒用BamHⅠ切割后，含有4個游離的磷酸基團(tuán)

B．在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，可用PstⅠ和BamHⅠ切割質(zhì)粒和外源DNA

C．用PstⅠ和HindⅢ酶切，加入DNA連接酶后可得到1種符合要求的重組質(zhì)粒

D．導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長

質(zhì)粒是常用的基因工程載體。下圖是某種天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖(標(biāo)示了部分基因及部分限制酶的作用位點(diǎn))，據(jù)圖分析下列說法正確的是(??? )

A．圖中的終止子是由三個相鄰堿基組成的終止密碼

B．用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將該質(zhì)粒構(gòu)建的表達(dá)載體導(dǎo)入動物細(xì)胞

C．用限制酶Ⅰ和DNA連接酶改造后的質(zhì)粒無法被限制酶Ⅱ切割

D．用限制酶Ⅱ處理能防止該質(zhì)粒構(gòu)建的表達(dá)載體引起植物瘋長

如圖表示利用棉花葉肉細(xì)胞進(jìn)行原生質(zhì)體培養(yǎng)的過程，據(jù)圖分析不正確的是(??? )

A．①過程是在0.5～0.6 mol/L的甘露醇溶液環(huán)境下用纖維素酶和果膠酶處理

B．②過程表示原生質(zhì)體在培養(yǎng)基提供的特定條件下形成愈傷組織，此過程叫做再分化

C．③過程中以適當(dāng)配比的營養(yǎng)物質(zhì)和生長調(diào)節(jié)劑進(jìn)行誘導(dǎo)

D．該過程體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性

某研究小組為測定藥物對體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對某種動物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。下列說法正確的是(??? )

A．在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時，也可用胃蛋白酶處理

B．細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用是刺激細(xì)胞呼吸

C．甲、乙細(xì)胞在持續(xù)的培養(yǎng)過程中，乙會出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象

D．僅用培養(yǎng)肝細(xì)胞的培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒

關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的敘述，錯誤的是(??? )

A．動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基不同

B．動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)過程中都要用到胰蛋白酶

C．煙草葉片離體培養(yǎng)能產(chǎn)生新個體，小鼠雜交瘤細(xì)胞可離體培養(yǎng)增殖

D．動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)，莖尖培養(yǎng)可用于植物脫除病毒

如圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。下列有關(guān)敘述正確的是(??? )

A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞

B．②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細(xì)胞的形成

C．③同時具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性

D．④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群

科學(xué)家將人的生長激素基因與大腸桿菌的DNA分子進(jìn)行重組，并成功地在大腸桿菌中得以表達(dá)。但在進(jìn)行基因工程的操作過程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的識別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—，請據(jù)圖回答：

(1)過程①所需要的酶是________。

(2)在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程中，應(yīng)用限制酶______切割質(zhì)粒，用限制酶______切割目的基因。用限制酶切割目的基因和載體后形成的黏性末端通過__________________原則進(jìn)行連接。人的基因之所以能與大腸桿菌的DNA分子進(jìn)行重組，原因是

________________________________________________________________________。

(3)在過程③中一般將受體大腸桿菌用________________進(jìn)行處理，以增大____________的通透性，使含有目的基因的重組質(zhì)粒容易進(jìn)入受體細(xì)胞。

(4)將得到的大腸桿菌B涂布在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，得到如圖a所示的結(jié)果(圓點(diǎn)表示菌落)，該結(jié)果說明能夠生長的大腸桿菌中已導(dǎo)入了____________________，反之則沒有導(dǎo)入；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基a上，使絨布表面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b所示的結(jié)果(圓圈表示與圖a中培養(yǎng)基上對照無菌落的位置)。與圖b圓圈相對應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型是__________________________，這些大腸桿菌中導(dǎo)入了________________。

(5)人體的生長激素基因能在大腸桿菌體內(nèi)成功表達(dá)是因?yàn)?/span>______________________。目的基因?qū)�入大腸桿菌中后表達(dá)的過程是______________________________________。

植物組織培養(yǎng)是克隆植物的一種方法，其過程如圖所示，據(jù)圖回答下列問題。

(1)為了獲得脫毒植株，外植體往往取自植物的花芽、葉芽等處的分生組織，其原因是

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(2)培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基中除需添加營養(yǎng)物質(zhì)外，還需要添加植物激素，其目的是誘導(dǎo)外植體________________。

(3)在生產(chǎn)實(shí)踐中為獲得大量的細(xì)胞產(chǎn)物，如紫杉醇，可將①______________放入液體培養(yǎng)基中，經(jīng)機(jī)械作用分散成單個細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸浮液，再經(jīng)過____________即可獲得大量細(xì)胞。

(4)植物組織培養(yǎng)過程需要在植物生長和繁殖的最適條件下進(jìn)行，否則在光學(xué)顯微鏡下可能觀察到細(xì)胞的______________________發(fā)生了異常，進(jìn)而導(dǎo)致植物性狀遺傳不穩(wěn)定甚至出現(xiàn)不育。

(5)植物組織培養(yǎng)技術(shù)不僅應(yīng)用于花卉和果樹的快速大量繁殖以及脫毒植株的獲取，還廣泛應(yīng)用于______________________、______________、____________等育種過程。

花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質(zhì)體可使其染色體片段化，并喪失再生能力。再利用此原生質(zhì)體作為部分遺傳物質(zhì)的供體與完整的花椰菜原生質(zhì)體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株。流程如下圖：

據(jù)圖回答下列問題：

(1)過程①所需的酶是______________________________________________________。

(2)過程②后，在顯微鏡下觀察融合的活細(xì)胞中有供體的________存在，這一特征可作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。

(3)原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是________________。原生質(zhì)體經(jīng)過________再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。

(4)若分析再生植株的染色體變異類型，應(yīng)剪取再生植株和________植株的根尖，通過________、________、染色和制片等過程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。

下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程及有關(guān)資料，請分析回答下列問題。

資料1? 巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，同時AOX1基因也會因受到誘導(dǎo)而表達(dá)[5’AOX1和3’AOX1(TT)分別是基因AOX1的啟動子和終止子]。

資料2? 巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，所以科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。

(1)如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上________、_______限制酶識別序列，這樣設(shè)計的優(yōu)點(diǎn)是避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化。

(2)酶切獲取HBsAg基因后，需用________將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取________________。

(3)步驟3中應(yīng)選用限制酶________來切割重組質(zhì)粒獲得重組DNA，然后將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。

(4)為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入卡拉霉素以便篩選，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因，可以用__________________方法進(jìn)行檢測。

(5)轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入________以維持其生活，同時誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)。

(6)與大腸桿菌等細(xì)菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是在蛋白質(zhì)合成后，細(xì)胞可以對其進(jìn)行________并分泌到細(xì)胞外，便于提取。