Question

4．下面是將某細菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)，制備“工程菌”的示意圖：

請據(jù)圖回答：
（1）獲得A有兩條途徑：一是以A的mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄（或“反轉(zhuǎn)錄”）酶的催化下，合成互補的單鏈DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需基因；二是根據(jù)目標蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測其DNA的脫氧核苷酸序列，再通過化學(xué)方法合成所需基因．
（2）利用PCR技術(shù)擴增DNA時，需要在反應(yīng)體系中添加的有機物質(zhì)有引物、模板（A基因）、4種脫氧核苷酸三磷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合（或“Taq”）酶，擴增過程可以在PCR擴增儀中完成．
（3）在基因工程中，利用大腸桿菌生產(chǎn)胰島素時，構(gòu)建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子，其中啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位．在用表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用Ca²⁺處理大腸桿菌，其目的是使其成為感受態(tài)細胞，有利于吸收重組DNA分子．為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可利用分子雜交技術(shù)；為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是將某細菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)，制備“工程菌”的示意圖，其中A為目的基因，B為運載體（質(zhì)粒），C為重組質(zhì)粒，D為受體細胞．

解答 解：（1）獲得A有兩條途徑：一是以A的mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，合成合成雙鏈DNA，從而獲得所需基因；二是根據(jù)目標蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測其DNA的脫氧核苷酸序列，再通過人工合成（化學(xué)）方法合成所需基因．
（2）利用PCR技術(shù)擴增DNA時所需的條件：引物、模板DNA（目的基因或A基因）、原料（4種脫氧核糖核苷酸）和耐熱性的DNA聚合酶等．
（3）在基因工程中，利用大腸桿菌生產(chǎn)胰島素時，構(gòu)建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子，其中啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位．在用表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用Ca²⁺處理大腸桿菌，其目的是使其成為感受態(tài)細胞，有利于吸收重組DNA分子．為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可利用分子雜交技術(shù)；為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄（或“反轉(zhuǎn)錄”）                    脫氧核苷酸
（2）引物      模板（A基因）（兩空可調(diào)換位置）    熱穩(wěn)定DNA聚合（或“Taq”）
（3）RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位     Ca²⁺     感受態(tài)      分子雜交        抗原-抗體雜交

點評 本題結(jié)合制備“工程菌”的示意圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握步驟中的相關(guān)細節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．