Question

【題目】下圖是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒PO具有四環(huán)素抗性基因 ( telr)和氨芐青霉索抗性基因(ampr)。請回答下列問題：

(1)基因工程中所用的目的基因可以從自然界中已有的物種中分離出來，也可以 _________。利用PCR技術(shù)擴增目的基因片段時，常使用的酶是____ 。

(2)重組載體構(gòu)建的過程中所需的酶有 ____和 ____。

(3)為進一步鑒定菌體是否含有重組質(zhì)粒P3，采用含有不同抗生素的平板進行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“+”代表生長，“-”代表不生長）。

菌落類型 平板類型	A	B	C
無抗生素	+	+	+
氨芐青霉素	+	-	+
四環(huán)素	+	-	-
氨芐青霉素+四環(huán)素	+	-	-

根據(jù)表中結(jié)果判斷，A、B、C菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是____、____、____。

(4)將目的基因?qū)�入動物細胞的常用方法�?/span>____。

Answer 1

【答案】用人工的方法合成 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或“Taq酶”或“Taq DNA聚合酶”） 限制性核酸內(nèi)切酶（或“限制酶”或“EcoR V”） DNA連接酶 已導(dǎo)入質(zhì)粒PO 未導(dǎo)入質(zhì)粒 已導(dǎo)入質(zhì)粒P3 顯微注射技術(shù)

【解析】

基因表達載體的基本結(jié)構(gòu)包括復(fù)制原點、目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子等。分析題文描述和圖示信息可知，載體質(zhì)粒PO含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標(biāo)記基因，可用于檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后會破壞四環(huán)素抗性基因（tetr）。

(1) 基因工程中所用的目的基因可以從自然界中已有的物種中分離出來，也可以用人工的方法合成。利用PCR技術(shù)擴增目的基因片段時，所控制的溫度條件至少為50℃左右，常使用的酶是具有耐高溫特性的熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或“Taq酶”、“Taq DNA聚合酶”）。

(2) 重組載體構(gòu)建的過程中，需使用限制酶（EcoRV）切割載體質(zhì)粒和含有目的基因的DNA片段，再用DNA連接酶將切割后的載體質(zhì)粒和目的基因連接起來。

(3) 由圖可知：用限制酶（EcoRV）切割后破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr），但是沒有破壞氨芐青霉素抗性基因（ampr），因此含有重組質(zhì)粒P3的菌落在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長，但在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能生長。分析表中信息：A菌落在含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都能夠生長，說明其菌體中含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）的結(jié)構(gòu)均完好，因此已導(dǎo)入質(zhì)粒PO。B菌落在含有任何抗生素的培養(yǎng)基中都不能生長，說明其菌體中不含有ampr tetr，所以未導(dǎo)入質(zhì)粒。C菌落在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長，但在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能生長，說明其菌體中含有的ampr的結(jié)構(gòu)完好，而含有的tetr的結(jié)構(gòu)被破壞，因此C菌落已導(dǎo)入質(zhì)粒P3。

(4) 將目的基因?qū)�入動物細胞，常用顯微注射技術(shù)。