Question

4．為獲取可降解高鹽度工業(yè)廢水中有機物的耐鹽菌，研究人員進行了如下實驗：
①制備含3% NaCl的固體培養(yǎng)基，以及含3010、5%和7% NaCl以高鹽度工業(yè)廢水中有機物為碳源的液體培養(yǎng)基；
②將高鹽度廢水采用平板劃線法接種子含3% NaCl的固體培養(yǎng)基，如圖一．然后置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察形成的菌落特征；
③將分離純化后的菌株接種到固體斜面培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)適當時間，將試管置于4℃冰箱中保藏待用；
④取固體斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分別加入到步驟①中制備的3組液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)35小時，定時取樣統(tǒng)計活菌數(shù)目．測定結果如圖二所示．

回答下列問題：
（1）配制培養(yǎng)基時，滅菌、添加NaCl溶液和調節(jié)pH的先后順序是添加NaCI溶液、調節(jié)pH、滅菌．
（2）步驟②平板劃線操作過程中，第一次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是防止雜菌污染，第二次及之后的幾次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端）．完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)6次．
（3）步驟④中常采用稀釋涂布平板法法統(tǒng)計活菌數(shù)目．直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計數(shù)的做法是錯誤的，正確的操作是將培養(yǎng)液搖勻后取樣計數(shù)．若每種濃度設3個重復實驗，每次統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要從9個培養(yǎng)瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌最適合處理含3%（濃度）NaCl的廢水．用該耐鹽菌處理較高鹽度工業(yè)廢水時，需要適當延長處理時間（增大接種量）（合理措施），才能達到理想效果．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、實驗室常用的滅菌方法
①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；
②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；
③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min．

解答 解：（1）配制培養(yǎng)基時，需待各種營養(yǎng)成分配制完成后再調節(jié)pH，最后進行滅菌．
（2）平板劃線操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；劃線操作結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者．由于圖1中有5次劃線，每次劃線完需灼燒，再加上第一步灼燒，故完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)6次．
（3）據(jù)試驗操作可知，步驟④中常采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目．取樣時不能直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計數(shù)，需將培養(yǎng)液搖勻后取樣計數(shù)．由于每種濃度設3個重復實驗，共有3種不同濃度，故每次統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要從9個培養(yǎng)瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌 在3% NaCl最多，故最適合處理含 3% NaCl的廢水．用該耐鹽菌處理較高鹽度工業(yè)廢水時，需要適當延長處理時間，以增大接種量，才能達到理想效果．
故答案為：
（1）添加NaCI溶液、調節(jié)pH、滅菌
（2）殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端）    6
（3）稀釋涂布平板法     將培養(yǎng)液搖勻后取樣計數(shù)    9
（4）3%  適當延長處理時間（增大接種量）

點評 本題考查微生物的分離與培養(yǎng)、培養(yǎng)基的配制以及消毒和滅菌等有關方面的知識，意在考查學生對相關實驗的實驗原理、步驟、操作技能的掌握情況．