Question

（五）下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖l、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有

 

個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．
（2）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是

 

．
（3）與只使用EcoR I相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止

 

．
（4）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，需加入

 

酶．重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了

 

．
（5）為了從cDNA文庫(kù)中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在

 

的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)．
（6）若用限制酶EcoRV、MboI單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得到DNA片段長(zhǎng)度如下圖（1kb即1000個(gè)堿基對(duì)），請(qǐng)?jiān)诖痤}卡的指定位置畫(huà)出質(zhì)粒上EcoRV、MboI的切割位點(diǎn)．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的應(yīng)用

專(zhuān)題：

分析：基因工程育種的原理是基因重組，具體操作步驟是：獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)盒鑒定．關(guān)注限制酶具有特異性，切割目的基因和運(yùn)載體需要同一種限制酶．DNA連接酶連接連接目的基因和運(yùn)載體限制酶切割的末端位置．基因表達(dá)載體上有標(biāo)志基因，一般是抗性基因，目的是鑒定和篩選含有目的基因的細(xì)胞．大腸桿菌突變體喪失吸收蔗糖能力，利用選擇性培養(yǎng)基，篩選出所需要的菌種．

解答： 解：
（1）質(zhì)粒為小型環(huán)狀的DNA分子，環(huán)狀DNA分子中沒(méi)有游離的磷酸基團(tuán)；經(jīng)Sma切割后在切口處每端各含1個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．        故答案為：0，2
（2）若用Sma切割質(zhì)粒和外源DNA，則質(zhì)粒中作為標(biāo)記基因的抗性基因的結(jié)構(gòu)被破壞，外源DNA中目的基因的結(jié)構(gòu)也會(huì)被破壞．        故答案為：SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
（3）若只使用EcoR切割目的基因和外源DNA，則除了含目的基因的片段和質(zhì)粒連接外，質(zhì)粒和含目的基因的片段可能會(huì)自身連接而環(huán)化．        故答案為：質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化．
（4）含目的基因的片段與質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒，需DNA連接酶將兩個(gè)DNA片段的末端“縫隙”連接起來(lái)．重組質(zhì)粒中的抗性基因是作為標(biāo)記基因，便于鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞．          故答案為：DNA連接       鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞
（5）目的基因?yàn)檎崽寝D(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，所用的受體細(xì)胞為喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，若將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，則受體細(xì)胞應(yīng)能從培養(yǎng)基中吸收蔗糖，故應(yīng)在以蔗糖為惟一碳源的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)．        故答案為蔗糖為唯一含碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
（6）從題目的已知條件看，該質(zhì)粒共有堿基14kb，在質(zhì)粒上有MboI酶的兩個(gè)切點(diǎn)，有EcoRV酶的一個(gè)切點(diǎn)，再根據(jù)二者共切后的片段分成情況，即可繪制出在質(zhì)粒上兩種酶的切點(diǎn)．      故答案為：

點(diǎn)評(píng)：本題綜合考查基因工程的工具與操作過(guò)程，意在考查考生的識(shí)圖分析與應(yīng)用知識(shí)的能力