Question

2．重組酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技術(shù)使乙肝病毒相關(guān)基因在酵母菌內(nèi)表達并大規(guī)模培養(yǎng)，從而提取制成疫苗．
（1）下圖是獲取目的基因的流程：

①圖中基因組文庫大于（小于/等于/大于）cDNA文庫．
②B過程需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶；A、C過程中可以 （可以/不可以）使用同一種探針篩選含目的基因的菌株．
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構(gòu)建的文庫中分離外，還可以分別利用圖中DNA和cDNA為模板直接進行PCR擴增，該過程中所用酶的顯著特點是耐高溫．
（2）構(gòu)建基因表達載體時用限制酶切割DNA后可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端，后者需用T₄（E•coil/T₄） DNA連接酶通過催化磷酸二酯鍵使目的基因與質(zhì)粒連接起來．為使目的基因在酵母菌細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的目的基因片段正確插入表達載體的啟動子和終止子之間．
（3）在導(dǎo)入表達載體時常用Ca⁺處理酵母菌，使其成為感受態(tài)細胞，再與表達載體于緩沖液中混合，在一定的溫度下完成轉(zhuǎn)化．
（4）為了檢測目的基因是否成功翻譯，可以用抗原-抗體雜交技術(shù)，若沒有出現(xiàn)相應(yīng)的雜交帶，則可能需要用帶標(biāo)記的目的基因做探針來檢測是否轉(zhuǎn)錄出mRNA．

Answer 1

分析 分析題圖：A表示從基因組文庫中獲取含有目的基因的菌株；B表示逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；C表示從基因組文庫中篩選獲得含有目的基因的菌株．基因組文庫是指將某生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA片段克隆到某種載體上形成的信使，而cDNA文庫是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達，所以cDNA文庫小于基因組文庫．

解答 解：（1）①基因組文庫包含某種生物所有的基因，而cDNA文庫是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達，cDNA文庫只包含某種生物部分基因，所以cDNA文庫小于基因組文庫．
②B過程是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶．根據(jù)堿基互補配對原則，A、C過程可以使用同一種探針篩選含目的基因的菌株．
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構(gòu)建的文庫中分離外，還可以分別利用圖中DNA和cDNA為模板直接進行PCR擴增．PCR技術(shù)是在高溫條件下進行的，該過程中所用酶要耐高溫．
（2）T₄DNA連接酶能連接平末端的磷酸二酯鍵，使目的基因與質(zhì)粒連接起來．為使目的基因在酵母菌細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的目的基因片段正確插入表達載體的 啟動子和終止子之間．
（3）將目的基因?qū)�入微生物細胞時，常用Ca⁺處理酵母菌，使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞，再與表達載體于緩沖液中混合，在一起的溫度下完成轉(zhuǎn)化．
（4）檢測目的基因是否整合到受體細胞的染色體上，可通過DNA分子雜交技術(shù)進行檢測；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄形成mRN，可通過分子雜交技術(shù)進行檢測．這兩種技術(shù)都需要用帶標(biāo)記的目的基因做探針．檢測目的基因是否成功翻譯，可以用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）①大于       ②逆轉(zhuǎn)錄酶     可以        ③DNA     cDNA          耐高溫
（2）T₄         磷酸二酯       啟動子         終止子
（3）感受態(tài)
（4）抗原-抗體雜交        帶標(biāo)記的目的基因

點評 本題考查基因操作的基本過程弄清cDNA文庫和基因組文庫的差別、基因表達載體的構(gòu)成、目的基因獲取途徑和導(dǎo)入受體細胞的方法是正確解答該題的前提．