Question

回答有關微生物的問題．
已知某細菌的兩種突變類型細菌Ⅰ和細菌Ⅱ的營養(yǎng)條件和菌落特征都相同，但細菌Ⅰ能分解有機物A而不能分解有機物B，細菌Ⅱ能分解有機物B而不能分解有機物A．現有這兩種類型細菌的混合液樣品，要將其分離，有人設計了一種方案，部分操作步驟如圖．

（1）步驟一使用的是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，其中含有細菌生長所需的水、

 

等營養(yǎng)物質（至少寫出3種）；該培養(yǎng)基是

 

（多選）．
A．固體培養(yǎng)基    B．液體培養(yǎng)基    C．通用培養(yǎng)基    D．選擇培養(yǎng)基
（2）步驟一采用

 

接種，此接種法可使接種細菌逐漸稀釋，經適宜條件培養(yǎng)，可能形成單個、獨立的，最終可能得到純種的細菌；步驟二各瓶中的培養(yǎng)基加入了A、B兩種有機物的目的是

 

．
（3）無論是培養(yǎng)基（液），接種前除了要調節(jié)pH外，都必須對培養(yǎng)基進行；接種時必須在超凈工作臺及酒精燈火焰附近操作，原因是

 

．
（4）步驟三中，若對其中某瓶培養(yǎng)液中A、B兩種有機物含量進行測定，預測可能的結果并推測結論：
①A與B兩種化合物含量都明顯下降，說明瓶中同時存在細菌Ⅰ和細菌Ⅱ，兩者未分離．
②

 

．
③

 

．
（4）經步驟三后，若所有瓶中培養(yǎng)液的A、B化合物含量測定結果都如39題中①的情況，則應

 

，再測定各瓶中A、B兩種化合物的含量，直到分別獲得每種類型細菌為止．

Answer 1

考點：微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：解答本題需掌握：1．培養(yǎng)基的概念、種類及營養(yǎng)構成
（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質．

（3）營養(yǎng)構成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求．
2．無菌技術
（1）關鍵：防止外來雜菌的入侵．
（2）具體操作
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒．
②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌．
③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行．
④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸．
3、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．
4、接種方法：平板劃線法和稀釋涂布法．
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環(huán)，按無菌操作法挑取少量菌種．
②劃A區(qū)：將平板倒置于煤氣（酒精）燈旁，左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養(yǎng)基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁），右手拿接種環(huán)先在A區(qū)劃3-4條連續(xù)的平行線（線條多少應依挑菌量的多少面定）．劃完A區(qū)后應立即燒掉環(huán)上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區(qū)的分離效果．在燒接種環(huán)時，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方（不要放入皿蓋內），以防止雜菌的污染．
③劃其他區(qū)：將燒去殘菌后的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基邊緣冷卻一下，并使B區(qū)轉到上方，接種環(huán)通過A區(qū)（菌源區(qū)）將菌帶到B區(qū)，隨即劃數條致密的平行線．再從B區(qū)作C區(qū)的劃線．最后經C區(qū)作D區(qū)的劃線，D區(qū)的線條應與A區(qū)平行，但劃D區(qū)時切勿重新接觸A、B區(qū)，以免極該兩區(qū)中濃密的菌液帶到D區(qū)，影響單菌落的形成．隨即將皿底放入皿蓋中．燒去接種環(huán)上的殘菌．
④等平板凝固后，將平板倒置．
（2）稀釋涂布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)．在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落．能夠測定樣品中活菌數的方法是：稀釋涂布平板法．

解答： 解：（1）各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，該培養(yǎng)基是通用培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基或選擇培養(yǎng)基．
（2）由圖可知，步驟一采用平板劃線法接種，步驟二各瓶中的培養(yǎng)基加入了A、B兩種有機物的目的是篩選、分離兩種類型的細菌．
（3）接種時必須在超凈工作臺及酒精燈火焰附近操作，原因是防止雜菌污染．
（4）若對其中某瓶培養(yǎng)液中A、B兩種有機物含量進行測定，若A與B兩種化合物含量都明顯下降，說明瓶中同時存在細菌Ⅰ和細菌Ⅱ，說明兩者未分離；若A含量明顯下降，而B含量幾乎未變，則得到細菌Ⅰ；若B含量明顯下降，而A含量幾乎未變，則得到細菌Ⅱ．
（5）經步驟三后，若所有瓶中培養(yǎng)液的A、B化合物含量都下降，說明兩種細菌還未分開，則需要重復步驟1和步驟2再測定各瓶中A、B兩種化合物的含量，直到分別獲得每種類型細菌為止．
故答案為：
（1）無機鹽、碳源、氮源   B、C、D
（2）劃線法  篩選、分離兩種類型的細菌
（3）防止雜菌污染
（4）②A含量明顯下降，而B含量幾乎未變，則得到細菌Ⅰ③B含量明顯下降，而A含量幾乎未變，則得到細菌Ⅱ
（5）重復步驟1和步驟2

點評：本題主要考查微生物的實驗室培養(yǎng)的相關知識，意在考查考生對相關知識的理解，把握知識間內在聯系的能力．