Question

13．研究人員在培育轉(zhuǎn)bt基因抗蟲番茄過程中，選用hpt（抗潮霉素基因）為標(biāo)記基因．為了提高轉(zhuǎn)基因番茄的安全性，在篩選成功后，用Cre酶（能特異識別loxp位點，切除loxp位點間的基因序列）切除hpt．相關(guān)技術(shù)流程如圖．

（1）步驟①中，為防止原番茄植株帶有病毒，應(yīng)選用分生組織（或莖尖或根尖或芽尖）作為外植體；培養(yǎng)時，常在培養(yǎng)基中加入2，4-D，其作用是誘導(dǎo)形成愈傷組織（或誘導(dǎo)脫分化）．
（2）步驟②將bt基因?qū)�入愈傷組織的最常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）步驟③需在培養(yǎng)基中加入潮霉素以初步篩選出轉(zhuǎn)入bt基因的植株．
（4）提取F1植株的基因組DNA，用hpt特異性引物進(jìn)行PCR．其中，植株1和2的PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如上圖，據(jù)此判斷，植株2為不具有hpt的抗蟲番茄．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示轉(zhuǎn)bt基因抗蟲番茄的培育過程，其中①表示脫分化過程，②表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，③表示再分化和篩選過程，最后還要用Cre酶（能特異識別loxp位點，切除loxp位點間的基因序列）切除hpt．據(jù)此答題．

解答 解：（1）由于植物分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒，因此步驟①中，為防止原番茄植株帶有病毒，應(yīng)選用分生組織（或莖尖或根尖或芽尖）作為外植體；該步驟所用的培養(yǎng)基中要加入2，4-D，其作用是誘導(dǎo)形成愈傷組織（或誘導(dǎo)脫分化）．
（2）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，因此步驟②將bt基因?qū)�入愈傷組織的最常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）由圖可知，抗性基因是潮霉素抗性基因，因此步驟③需在培養(yǎng)基中加入潮霉素以初步篩選出轉(zhuǎn)入bt基因的植株．
（4）提取F1植株的基因組DNA，用hpt特異性引物進(jìn)行PCR．其中，植株1出現(xiàn)PCR產(chǎn)物，說明其具有hpt，而植株2沒有出現(xiàn)PCR產(chǎn)物，說明其不具有hpt．因此，植株2為不具有hpt的抗蟲番茄．
故答案為：
（1）分生組織（或莖尖或根尖或芽尖）誘導(dǎo)形成愈傷組織（或誘導(dǎo)脫分化）
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）潮霉素
（4）2

點評 本題結(jié)合轉(zhuǎn)bt基因抗蟲番茄的培育過程圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合題中和圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．