Question

【題目】凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法�？蒲腥藛T在實(shí)驗(yàn)室中利用初步獲得的豬紅細(xì)胞液體進(jìn)行血紅蛋白（相對(duì)分子質(zhì)量約為64000）的提取、分離和鑒定實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）將初步獲得的紅細(xì)胞洗滌好后加入____________，經(jīng)攪拌、離心、分層后分出血紅蛋白溶液，再裝入____________中12小時(shí)，即完成粗分離。

（2）粗分離的血紅蛋白溶液中含有一些微蛋白（相對(duì)分子質(zhì)量約為11800），這兩種蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)，____________（填“血紅蛋白”或“微蛋白”）移動(dòng)速度較快，原因是_____________________。

（3）在純化洗脫血紅蛋白時(shí)，需要加入____________（填“磷酸緩沖液”或“生理鹽水”），理由是________________________。

（4）為鑒定血紅蛋白的純度，要利用電泳實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離，常用的兩種電泳方法是____________。

Answer 1

【答案】蒸餾水和甲苯 透析袋 血紅蛋白 血紅蛋白相對(duì)分子質(zhì)量較大，無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)， 路程較短，因此移動(dòng)速度較快 磷酸緩沖液 保持體外溶液的pH與體內(nèi)環(huán)境中的pH基本-致，維持蛋白質(zhì)正常結(jié)構(gòu)和功能（或讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其正常結(jié)構(gòu)和功能） 瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳

【解析】

血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經(jīng)過(guò)透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。

（1）血紅蛋白樣品處理及粗分離時(shí)，為了釋放血紅蛋白需要加入蒸餾水和40%甲苯，細(xì)胞破裂釋放血紅蛋白，然后離心分層出血紅蛋白溶液，最后進(jìn)行透析。

（2）凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體，相對(duì)分子量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢；相對(duì)分子量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。比較分子量，血紅蛋白分子量大于微蛋白，所以血紅蛋白移動(dòng)速度較快。

（3）洗脫時(shí)需要加入磷酸緩沖液，主要是保持體外溶液的pH與體內(nèi)環(huán)境中的pH基本一致，讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其正常結(jié)構(gòu)和功能。

（4）為鑒定血紅蛋白的純度，要利用電泳實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離，常用的兩種電泳方法是：瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。