Question

生物技術實踐
（1）商品化植酸酶主要來自微生物．在產酶菌株篩選過程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產生

 

，可根據其大小選擇目的菌株，所得菌株需要進一步測定植酸酶活性．活性測定可以植酸鈉作為底物，活性可用一定條件下單位時間

 

表示．
（2）利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如圖：

Ⅰ中的主要成分為

 

；Ⅱ中包含多種酸酶等多種蛋白質．請寫出一種純化得到植酸酶的方法及其依據．
（3）為建設基因工程菌，可用PCR等技術從上述菌株中克隆植酸酶基因．PCR反應包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步：

 

．反應過程中打開模板DNA雙鏈的方法是

 

．
（4）除植酸酶外，微生物還應用在

 

的生產中．

Answer 1

考點：蛋白質的提取和分離

專題：

分析：植酸酶能使植酸鈣分解成易溶于水的植酸和金屬離子，這是植酸鈣制備植酸的途徑；PCR技術是利用DNA雙鏈復制的原理，生物體外復制特定DNA的核酸合成技術．

解答： 解：（1）根據選擇培養(yǎng)基的原理，在產酶菌株篩選過程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產生透明圈，如果需要進一步測定植酸酶活性，可用一定條件下單位時間表示．酶活性鑒定可以用一定條件下單位時間內底物消耗量或反應生成物量表示．
（2）由菌株制備植酸酶的流程圖可知：透析的目的是去除小分子雜質，Ⅰ中透析液的主要成分為小分子雜質．
純化得到植酸酶的方法，凝膠色譜法：根據蛋白質之間分子大小，吸附性質等差異進行純化．（或電泳法：根據蛋白質之間電荷，分子大小等差異進行純化．）
（3）PCR技術是利用DNA雙鏈復制的原理，PCR反應包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步：變性，復性，延伸．反應過程中打開模板DNA雙鏈的方法是加熱，使雙鏈打開．
（4）商品化植酸酶主要來自微生物，除植酸酶外，微生物還應用在蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶的生產中．
故答案為：
（1）透明圈     植酸鈣的消耗量（肌醇和磷酸的生成量）
（2）小分子雜質
凝膠色譜法：根據蛋白質之間分子大小，吸附性質等差異進行純化．（或電泳法：根據蛋白質之間電荷，分子大小等差異進行純化．）
（3）變性、復性和延伸      加熱
（4）蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶

點評：本題考查對微生物的分離和培養(yǎng)，蛋白質的純化，酶活性鑒定等知識，結合實際應用．