Question

【題目】下圖是制備抗埃博拉病毒VP40蛋白的單克隆抗體的過程：

（1）若要體外獲得大量的VP40基因，可采用_______技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，若該目的基因循環(huán)擴(kuò)增3次，理論上需要消耗_______個(gè)引物。

（2）過程①中除選用EcoRⅠ和XhoⅠ兩種限制酶外，還要用到________酶。

（3）過程②中VP40基因進(jìn)入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達(dá)的過程稱為____________，大腸桿菌等原核生物常作為受體細(xì)胞的原因 ______________________________（寫出兩點(diǎn)）。

（4）與植物原生質(zhì)體融合相比，過程④特有的誘導(dǎo)融合的方法是用____________處理。通常在選擇培養(yǎng)基中需加入__________，目的是防止培養(yǎng)過程中的污染。對(duì)雜交瘤細(xì)胞還需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和_______________，最終獲得單克隆抗體。

Answer 1

【答案】PCR 14 DNA連接 轉(zhuǎn)化 繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等 滅活的病毒 抗生素 抗體檢測(cè)

【解析】

本題以圖文結(jié)合的形式，綜合考查學(xué)生對(duì)基因工程的基本操作程序、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、生產(chǎn)單克隆抗體等相關(guān)知識(shí)的識(shí)記和理解能力，以及識(shí)圖分析能力。

(1) VP40基因?yàn)槟康幕�因，可采用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增。PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制的原理，若該目的基因循環(huán)擴(kuò)增3次，則共形成23＝8個(gè)目的基因，除了最初親代目的基因的兩條模板鏈不含引物外，凡是新形成的子鏈均含有引物，因此理論上需要消耗2×8－2＝14個(gè)引物。

(2) 過程①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建，除選用EcoRⅠ和XhoⅠ兩種限制酶切割含有VP40基因的DNA片段和質(zhì)粒外，還要用到DNA連接酶將切割后獲得的VP40基因和質(zhì)粒連接。

(3) 過程②為將構(gòu)建的基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞（大腸桿菌細(xì)胞）中，VP40基因進(jìn)入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化。由于大腸桿菌等原核生物具有繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等特點(diǎn)，因此在基因工程中常作為受體細(xì)胞。

(4) 過程④為誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合。與植物原生質(zhì)體融合相比，過程④特有的誘導(dǎo)融合的方法是用滅活的病毒處理。通常在選擇培養(yǎng)基中加入抗生素的目的是防止培養(yǎng)過程中的污染。在單克隆抗體生產(chǎn)的過程中，對(duì)雜交瘤細(xì)胞還需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，以篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，才能最終獲得單克隆抗體。