Question

8．微載體是由天然葡聚糖或者各種合成的聚合物組成的顆粒，其直徑很小，將對細胞無害的微載體加入到培養(yǎng)容器的培養(yǎng)液中，作為載體，可使細胞在微載體表面附著生 長．微載體大規(guī)模細胞培養(yǎng)技術已廣泛應用于科研生產(chǎn)，其流程圖如圖．請回答：

（1）圖中過程a是利用用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動物組織，分散細胞．微載體加入培養(yǎng)罐中后，通過攪動使其保持懸浮狀態(tài)，便于細胞的生長繁殖和代謝，所以選用的微載體顆粒直徑應盡可能�。�
（2）圖中利用培養(yǎng)罐進行動物細胞的體外培養(yǎng)所需的條件是無菌、無毒的環(huán)境、營養(yǎng)、溫度和pH、氣體環(huán)境．
（3）圖中制備單克隆抗體的過程中，應先用選擇性培養(yǎng)基進行篩選出既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體特點）的雜交瘤細胞，然后培養(yǎng)．
（4）利用基因工程可以產(chǎn)生干擾素，可以通過顯微注射技術，將重組DNA分子導入哺乳動物的受精卵中，并送入母體，使其發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動物．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養(yǎng)條件：
（1）無菌無毒環(huán)境：無菌--對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理；在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素．；無毒--定期更換培養(yǎng)液，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對自身造成危害．
（2）營養(yǎng)：
成分：所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然成分．
培養(yǎng)基類型：合成培養(yǎng)基（將細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按其種類和所需數(shù)量嚴格配制而成的培養(yǎng)基）
（3）溫度和pH值：哺乳動物多以36.5±0.5℃為宜，多數(shù)細胞生存的適宜pH為7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5%CO₂的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)．O₂：是細胞代謝所必需的  CO₂主要作用是維持培養(yǎng)液的pH．
2、單克隆抗體的制備
（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應的B淋巴細胞
（2）獲得雜交瘤細胞
①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合；
②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，該雜種細胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體．
（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測
（4）將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖
（5）提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取

解答 解：（1）圖中過程a是分散動物細胞，由于動物細胞之間通過膠原蛋白相連，所以動物細胞培養(yǎng)前可通過胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，使細胞分散．培養(yǎng)動物細胞用培養(yǎng)液制成細胞懸液，便于細胞的生長繁殖和代謝，選用直徑應盡可能小的微載體顆粒．
（2）動物細胞的體外培養(yǎng)所需的條件是無菌、無毒的環(huán)境、充足的營養(yǎng)、適宜的溫度和pH、95%空氣加5%CO₂的混合氣體的氣體環(huán)境．
（3）制備單克隆抗體的過程，用選擇性培養(yǎng)基進行篩選，篩選出既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞．
（4）基因工程中，受體細胞是動物細胞時，用顯微注射技術將重組DNA分子導入哺乳動物的受精卵中．
故答案為：
（1）用胰蛋白酶或膠原蛋白酶     生長繁殖和代謝
（2）無菌、無毒   氣體環(huán)境
（3）選擇性培養(yǎng)基  既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體
（4）顯微注射 受精卵

點評 本題結(jié)合微載體大規(guī)模細胞培養(yǎng)技術過程圖解，考查基因工程、動物細胞工程和制備單克隆抗體的相關知識，要求考生識記轉(zhuǎn)基因技術的過程，掌握單克隆抗體制備過程中篩選的目的，明確動物細胞培養(yǎng)的條件，掌握各技術的步驟和細節(jié)是做本題的關鍵．