Question

1．在生物的生長發(fā)育過程中，基因是選擇性表達(dá)的．某真核生物，要想獲得極為稀少的mRNA及其克隆，可以用如圖所示的差異雜交法．Poly（A）是指位于mRNA上的150-200個(gè)腺苷酸殘基．請(qǐng)回答下列問題．
（1）利用表達(dá)目的mRNA的細(xì)胞獲得放射性標(biāo)志的探針時(shí)，需要用逆轉(zhuǎn)錄酶酶，可以用Poly（A）作為引物．
（2）用羥基磷灰石柱層析法，回收未雜交的³²P標(biāo)記的單鏈DNA（填“未雜交的³²P標(biāo)記的單鏈DNA”或“雜交分子”），用構(gòu)建cDNA（填“基因組”或“cDNA”）文庫．
（3）在生物的生長發(fā)育過程中．由于基因選擇性表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞分化，該過程的結(jié)果使多細(xì)胞生物體中的細(xì)胞趨向?qū)ｉT化，有利于提高各種生理功能的效率．
（4）若用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達(dá)目的mRNA細(xì)胞中獲得的單鏈DNA雜交，可能形成雜合雙鏈區(qū)和游離的單鏈區(qū)，原因是DNA分子中含有內(nèi)含子、非編碼區(qū)等序列，mRNA分子中沒有互補(bǔ)的堿基序列，仍然為兩條游離的單鏈，所以出現(xiàn)游離單鏈區(qū)．DNA分子中含有外顯子序列，mRNA中具有互補(bǔ)的堿基序列，互補(bǔ)堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)．

Answer 1

分析 分析圖解可知，圖中a表示轉(zhuǎn)錄形成mRNA，b表示逆轉(zhuǎn)錄形成DNA單鏈，c過程表示去除Poly（A），剩余的DNA片段作為探針，并和不表達(dá)目的mRNA的細(xì)胞中表達(dá)的基因中的mRNA雜交，從而獲得表達(dá)的基因的單鏈DNA．

解答 解：（1）分析圖解可知，利用表達(dá)目的mRNA的細(xì)胞獲得放射性標(biāo)志的探針的過程就是逆轉(zhuǎn)錄過程，因此需要用逆轉(zhuǎn)錄酶，用Poly（A）作為引物．
（2）根據(jù)題意可知“要想獲得極為稀少的mRNA及其克隆”，因此用羥基磷灰石柱層析法，回收未雜交的³²P標(biāo)記的單鏈DNA，由于該DNA是利用mRNA逆轉(zhuǎn)錄而來，不包含這種生物的全部基因，因此構(gòu)建的是cDNA文庫．
（3）在生物的生長發(fā)育過程中，由于基因選擇性表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞分化，該過程的結(jié)果使多細(xì)胞生物體中的細(xì)胞趨向?qū)ｉT化，有利于提高各種生理功能的效率．
（4）DNA分子中含有內(nèi)含子、非編碼區(qū)等序列，mRNA分子中沒有互補(bǔ)的堿基序列，仍然為兩條游離的單鏈，所以出現(xiàn)游離單鏈區(qū)．DNA分子中含有外顯子序列，mRNA中具有互補(bǔ)的堿基序列，互補(bǔ)堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)，因此用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達(dá)目的mRNA細(xì)胞中獲得的單鏈DNA雜交，可能形成雜合雙鏈區(qū)和游離的單鏈區(qū)．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄酶    Poly （A）    
（2）未雜交的³²P標(biāo)記的單鏈DNA     cDNA
（3）分化    專門化
（4）DNA分子中含有內(nèi)含子、非編碼區(qū)等序列，mRNA分子中沒有互補(bǔ)的堿基序列，仍然為兩條游離的單鏈，所以出現(xiàn)游離單鏈區(qū)．DNA分子中含有外顯子序列，mRNA中具有互補(bǔ)的堿基序列，互補(bǔ)堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)

點(diǎn)評(píng) 本題屬于信息題，考查了遺傳信息的表達(dá)和基因文庫構(gòu)建的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠通過圖示分析理解部分基因文庫獲得的原理，能夠區(qū)分通過反轉(zhuǎn)錄法合成的目的基因和細(xì)胞中原有基因的區(qū)別，區(qū)分基因組文庫和部分基因文庫，再結(jié)合題干信息答題，具有一定的難度．