Question

【題目】細(xì)胞周期受到一系列分子的精確調(diào)控，調(diào)控異常會(huì)引起細(xì)胞增殖異常，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。S蛋白與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，為研究S蛋白對(duì)腫瘤細(xì)胞有絲分裂是否具有調(diào)控作用，實(shí)驗(yàn)人員做了以下探索：

（1）獲得能表達(dá)融合蛋白（GFP-H2B）的人宮頸癌（Hela）細(xì)胞：染色體（質(zhì)）的主要成分是_____和蛋白質(zhì)，H2B是染色體中的一種蛋白；GFP是一種綠色熒光蛋白（利用熒光顯微鏡可以觀察活細(xì)胞中GFP發(fā)出的熒光）。將含融合基因的_____導(dǎo)入Hela細(xì)胞，使其能表達(dá)GFP-H2B，用于連續(xù)觀察活細(xì)胞中_____，從而判斷細(xì)胞所處的時(shí)期，進(jìn)而得出分裂各時(shí)期持續(xù)的時(shí)間。

（2）干擾癌細(xì)胞中S蛋白的表達(dá)：

將Hela-GFP-H2B細(xì)胞接種在細(xì)胞培養(yǎng)板的2個(gè)孔中，實(shí)驗(yàn)組加入能與S基因mRNA互補(bǔ)配對(duì)的siRNA，對(duì)照組應(yīng)加入_____；24h后，檢測(cè)S蛋白的含量，結(jié)果如右圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，____。

（3）Hela細(xì)胞的同步化處理：將（2）中的兩組細(xì)胞進(jìn)行如下圖所示的處理。

阻斷I：培養(yǎng)在含有過量的TdR（DNA復(fù)制抑制劑）的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)時(shí)間不短于（G2+M+G1）的時(shí)間總和，使細(xì)胞都停留在S期；

解除：更換正常的新鮮培養(yǎng)液，培養(yǎng)的時(shí)間應(yīng)控制在_____范圍之間；

阻斷II：處理與阻斷I相同。

經(jīng)過以上處理后，所有細(xì)胞都停留在細(xì)胞周期的某一時(shí)刻，請(qǐng)用在圖d中標(biāo)出_____，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期的同步化。

（4）活細(xì)胞成像，測(cè)定細(xì)胞分裂期的時(shí)間：

對(duì)上述同步化處理的兩組細(xì)胞放入正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)7h，再用熒光顯微鏡對(duì)各組細(xì)胞的有絲分裂期進(jìn)程進(jìn)行圖像采集，5min采集一次圖像，部分結(jié)果如下：

圖中A細(xì)胞處于______期，D細(xì)胞發(fā)生的主要變化是______。由圖可知，__________。由此表明S蛋白的功能是______。

（5）請(qǐng)你提出一個(gè)進(jìn)一步研究的課題：__________。

Answer 1

【答案】DNA 表達(dá)載體 染色體存在狀態(tài) 堿基數(shù)目相同但不能與S蛋白mRNA互補(bǔ)配對(duì)的RNA（或“無關(guān)的RNA”） 實(shí)驗(yàn)組中的S基因的表達(dá)干擾成功 大于S，小于（G2+M+G1） 前 著絲點(diǎn)分裂，姐妹染色單體分離 從前期到中期持續(xù)時(shí)間實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組長 對(duì)細(xì)胞周期有調(diào)控作用，能明顯縮短前期到中期（前期）的時(shí)間 S蛋白調(diào)控細(xì)胞周期的機(jī)理；利用S蛋白研究抗腫瘤的靶向藥物；利用S蛋白對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控作用，抑制腫瘤生長的研究；探究S蛋白治療癌癥的途徑。

【解析】

1、染色體由蛋白質(zhì)和DNA組成，染色體是基因的主要載體，基因能知道蛋白質(zhì)的合成進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了對(duì)性狀的控制。

2、在顯微鏡下通過觀察染色體的行為變化來確定細(xì)胞所處的分裂時(shí)期。

（1）獲得能表達(dá)融合蛋白（GFP-H2B）的人宮頸癌（Hela）細(xì)胞：染色體（質(zhì)）的主要成分是DNA和蛋白質(zhì)，H2B是染色體中的一種蛋白；GFP是一種綠色熒光蛋白（利用熒光顯微鏡可以觀察活細(xì)胞中GFP發(fā)出的熒光）。將含融合基因的表達(dá)載體導(dǎo)入Hela細(xì)胞，使其能表達(dá)GFP-H2B，用于連續(xù)觀察活細(xì)胞中染色體的狀態(tài)，從而判斷細(xì)胞所處的時(shí)期，進(jìn)而得出分裂各時(shí)期持續(xù)的時(shí)間。

（2）將Hela-GFP-H2B細(xì)胞接種在細(xì)胞培養(yǎng)板的2個(gè)孔中，實(shí)驗(yàn)組加入能與S基因mRNA互補(bǔ)配對(duì)的siRNA，對(duì)照組應(yīng)加入堿基數(shù)目相同但不能與S蛋白mRNA互補(bǔ)配對(duì)的RNA（或“無關(guān)的RNA”）；24h后，檢測(cè)S蛋白的含量，結(jié)果如右圖。圖中顯示實(shí)驗(yàn)組中沒有S蛋白出現(xiàn)，說明實(shí)驗(yàn)組中的S基因的表達(dá)干擾成功。

（3）實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期的同步；阻斷I：由于培養(yǎng)液中含有過量的TdR（DNA復(fù)制抑制劑）的培養(yǎng)液中，在培養(yǎng)時(shí)間不短于（G2+M+G1）的時(shí)間總和，使細(xì)胞都停留在S期；

解除：更換正常的新鮮培養(yǎng)液，培養(yǎng)時(shí)間大于S保證了剛剛進(jìn)入S期而被停留的細(xì)胞解除，培養(yǎng)的時(shí)間小于（G2+M+G1）保證了度過S期而被停留的細(xì)胞的解除，故培養(yǎng)范圍應(yīng)在大于S，小于（G2+M+G1）。阻斷II的處理與阻斷I相同。故經(jīng)過以上處理后，所有細(xì)胞都停留在細(xì)胞周期S期，如圖所示：

（4）圖中A細(xì)胞處于前期，D細(xì)胞發(fā)生的主要變化是著絲點(diǎn)分裂，姐妹染色單體分離。由圖可知：從前期到中期持續(xù)時(shí)間實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組長。由此表明S蛋白的功能是對(duì)細(xì)胞周期有調(diào)控作用，能明顯縮短前期到中期（前期）的時(shí)間。

（5）進(jìn)一步研究的課題：S蛋白調(diào)控細(xì)胞周期的機(jī)理；利用S蛋白研究抗腫瘤的靶向藥物；利用S蛋白對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控作用，抑制腫瘤生長的研究；探究S蛋白治療癌癥的途徑。