Question

【題目】人外周血單核細胞能合成白細胞介素2（IL﹣2）。該蛋白可增強機體免疫功能，在體內易被降解。研究人員將IL﹣2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個融合基因，并在酵母菌中表達，獲得具有IL﹣2生理功能、且不易降解的IL﹣2﹣HSA融合蛋白。其技術流程如圖。請回答：

（1）②過程需要 酶；表達載體1中的位點 （填字母）應為限制酶BglⅡ的識別位點，才能成功構建表達載體2。

（2）在上述基因工程的操作過程中一般需要遵循堿基互補配對原則的步驟有 （用序號表示）。

（3）表達載體2導入酵母菌后，融合基因轉錄出的mRNA中，與IL﹣2蛋白對應的堿基序列不能含有 ，才能成功表達出IL﹣2﹣HSA融合蛋白。

利用PCR擴增儀大量擴增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據這一序列合成____ ______，除了該物質和目的基因外，擴增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和____ ______酶，并適時調整溫度，才能使目的基因數量成指數式增長。

Answer 1

【答案】（1）反（逆）轉錄酶 ；a ； （2）②③④ （3）終止密碼子；

（4）引物；熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）

【解析】（1）據圖可知，②過程是mRNA獲得cDNA的逆轉錄過程，該過程需要逆轉錄酶；根據圖解可知目的基因IL﹣2的兩端分別是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的，一般用同一限制酶切割才能形成相同的黏性末端，表達載體1中的啟動子之后具有EcoRⅠ的識別位點，因此位點a應為限制酶BglⅡ的識別位點，才能成功構建表達載體2。

（2）在上述基因工程的操作過程中一般需要遵循堿基互補配對原則的步驟有②逆轉錄、③PCR技術擴增目的基因、④基因表達載體的構建。

（3）融合基因轉錄出的mRNA中，與IL﹣2蛋白對應的堿基序列中如果含有終止密碼子，則會導致翻譯終止，不能成功表達出IL﹣2﹣HSA融合蛋白。

（4）利用PCR擴增儀大量擴增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據這一序列合成引物；擴增儀中除了需要加入引物、目的基因和四種脫氧核苷酸外，還需加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），并適時調整溫度，才能使目的基因數量成指數形式增長。