Question

【題目】基因工程需要用到多種工具，質(zhì)粒就是一種常見的工具——運(yùn)載體，某一質(zhì)粒載體如圖所示,外源DNA插入Ampr或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后,與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)。

（1）用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌,結(jié)果可能將會(huì)得到___類大腸桿菌（大致類型，不進(jìn)行數(shù)量、基因長度區(qū)分）。

（2）要篩選導(dǎo)入了含有目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，其特點(diǎn)是能抗_____而不能抗_____；要挑選出目的菌，必須在___（物理性質(zhì)）培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（3）圖中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn),經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被______酶切后的產(chǎn)物連接,理由是_________。

（4）重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞方法一般是______，最后該動(dòng)物細(xì)胞生長發(fā)育為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,進(jìn)入泌乳期后,可以通過分泌乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品,這些藥品的化學(xué)本質(zhì)大多為。

Answer 1

【答案】 4（未被轉(zhuǎn)化、僅含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒） 氨芐青霉素 四環(huán)素 固體 Sau3AⅠ 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端（或者產(chǎn)生的黏性末端能堿基互補(bǔ)配對(duì)） 顯微注射法 蛋白質(zhì)

【解析】本題考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記質(zhì)粒作為運(yùn)載體的條件，掌握目的基因檢測(cè)和鑒定的方法，再結(jié)合題干信息準(zhǔn)確分析。

（1）用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是僅含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒。

（2）BamHⅠ酶會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因，因此含有目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能產(chǎn)生抗四環(huán)素物質(zhì)，氨芐青霉素抗性基因沒有破壞，能產(chǎn)生抗氨芐青霉素物質(zhì)，因此該大腸桿菌能抗氨芐青霉素而不能抗四環(huán)素。固體培養(yǎng)基一般用于分離微生物，因此要挑選出目的菌，必須在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（3）分析圖解可知，限制酶Sau3AI和BamHI酶切割后形成的黏性末端相同，因此經(jīng)BamHI酶切割得到的目的基因可以與表達(dá)載體被Sau3AI酶切后的產(chǎn)物連接。

（4）重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞方法一般是顯微注射法，通過分泌乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品的化學(xué)本質(zhì)大多為蛋白質(zhì)。