Question

【生物--選修3現(xiàn)代生物科技專題】
為了解基因結(jié)構(gòu)，通常選取一特定長度的線性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過電泳技術(shù)將單酶水解片段分離，計算相對大�。蝗缓笤儆昧硪环N酶對單酶水解片段進行降解，分析片斷大�。�下表是某小組進行的相關(guān)實驗．

已知一線性DNA序列共有5000bp（bp為堿基對）	第一步水解	產(chǎn)物 （單位bp）	第二步水解	產(chǎn)物 （單位bp）
	A酶切割	2100	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用B酶切割	1900   200
		1400		800    600
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2500	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用A酶切割	1900   600
		1300		800    500
		1200		1000   200
	經(jīng)A酶和B酶同時切割	1900    1000    800    600    500    200

（1）由上表可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識別序列分別為

 

個和

 

個．
（2）根據(jù)表中數(shù)據(jù)，請在圖1中標出相應(yīng)限制性酶的酶切位點并注明相關(guān)片斷的大小

（3）巳知BamHI與BglII的識別序列及切割位點如圖2所示．用這兩種限制酶完全切割相應(yīng)的DNA片段時．產(chǎn)生的末端是

 

末端．現(xiàn)用這兩種酶和DNA連接酶對若干段同種DNA分子（含有BamHI與BglII的識別序列各一個）進行反復(fù)的切割（完全切割）、連接操作，若干循環(huán)．一段時間后反應(yīng)液中會出現(xiàn)多種核苷酸片段，其中能夠連接且不被BamHI與BglII切割的序列是

 

、

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：限制性核酸內(nèi)切酶是可以識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶，簡稱限制酶．由表格分析可知A酶切割后有4段產(chǎn)物，說明酶A有3個切割位點；B酶切割后有3段產(chǎn)物，說明酶B有2個切割位點．限制酶在它識別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的是黏性末端；限制酶在它識別序列的中心軸線將DNA切開時，產(chǎn)生的是平末端．

解答： 解：（1）A酶切割后形成4段，所以有3個識別位點，B酶切割后形成3段，所以有2個切割位點．
（2）由表中酶切割后片段長度可知，1900+600=2500，800+500=1300，1000+200=1200，所以連接如圖所示．

（3）巳知BamHI與BglII的識別序列及切割位點如圖2所示．用這兩種限制酶完全切割相應(yīng)的DNA片段時．限制酶在它識別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA兩條鏈分別切開，故產(chǎn)生的末端是黏性末端．現(xiàn)用這兩種酶和DNA連接酶對若干段同種DNA分子（含有BamHI與BglII的識別序列各一個）進行反復(fù)的切割（完全切割）、連接操作，若干循環(huán)．一段時間后反應(yīng)液中會出現(xiàn)多種核苷酸片段，其中能夠連接且不被BamHI與BglII切割的序列是、．
故答案為：
（1）3           2     
（2）

（3）黏性         

點評：本題意在考查考生的識記能力和理解所學(xué)知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運用所學(xué)知識，準確判斷問題的能力．要注意，獲取目的基因和切割載體時使用同種限制酶，目的是產(chǎn)生相同的黏性末端．獲取一個目的基因需限制酶剪切兩次，共產(chǎn)生 4個黏性末端或平末端．限制酶切割位點的選擇必須保證標記基因的完整性，以便于檢測．