Question

肺細(xì)胞中的let7基因表達(dá)減弱,癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng),會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá),發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。

請(qǐng)回答:

(1)進(jìn)行過(guò)程①時(shí),需用 酶切開載體以插入let7基因。載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,以驅(qū)動(dòng)let7基因轉(zhuǎn)錄,該部位稱為 。

(2)進(jìn)行過(guò)程②時(shí),需用 酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞,以利于傳代培養(yǎng)。

(3)研究發(fā)現(xiàn),let7基因能影響癌基因RAS的表達(dá),其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析,可從細(xì)胞中提取 進(jìn)行分子雜交,以直接檢測(cè)let7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制,可能是由于細(xì)胞中 (RAS mRNA/RAS蛋白)含量減少引起的。

 

Answer 1

(1)限制性核酸內(nèi)切(或限制) 啟動(dòng)子

(2)胰蛋白

(3)RNA RAS蛋白

【解析】(1)過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建,在該過(guò)程中需要用限制酶對(duì)載體進(jìn)行切割以便于目的基因的插入。啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列,是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的位點(diǎn),RNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn),可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。(2)過(guò)程②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理,使之分散成單個(gè)的細(xì)胞,之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)。(3)判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄,可用分子雜交技術(shù)來(lái)進(jìn)行,從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交。根據(jù)題中信息“肺細(xì)胞中的let7基因表達(dá)減弱,癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng),會(huì)引發(fā)肺癌”,導(dǎo)入let7基因后,肺癌細(xì)胞受到抑制,說(shuō)明RAS基因表達(dá)減弱,導(dǎo)致細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制。