Question

【題目】乙肝病毒（HBV）是部分雙鏈的DNA病毒，乙肝病毒引起的乙型肝炎不僅感染性高，而且危害大。下面是利用現(xiàn)代生物技術(shù)治療乙型肝炎的三種方法。請回答下列問題：

（1）方法Ⅰ屬于使用基因工程方法進行治療，可以用___________技術(shù)擴增HBV表面抗原基因。過程①不僅需要構(gòu)建___________，還需要對酵母菌進行處理，使其成為___________細胞，可通過___________技術(shù)確定轉(zhuǎn)基因酵母菌是否培養(yǎng)成功。

（2）方法Ⅱ中，培養(yǎng)細胞1時，培養(yǎng)液中除應(yīng)含有細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)添加___________等一些天然成分，經(jīng)過選擇性培養(yǎng)得到的細胞2還需進行克隆化培養(yǎng)和___________檢測，再經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。與植物細胞融合相比，過程②特有的方法是用___________處理。

（3）方法Ⅲ運用的是現(xiàn)在流行的基因編輯技術(shù)——CRISPR/Cas9系統(tǒng)，科學(xué)家借助納米脂質(zhì)顆粒將Cas9蛋白的mRNA和引導(dǎo)RNA通過___________方式送入肝細胞內(nèi)，然后Cas9mRNA經(jīng)翻譯合成Cas9蛋白，接著Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA組裝成 CRISPR/Ca59系統(tǒng)進入細胞核中，將整合在染色體上的乙肝病毒DNA進行基因編輯，使病毒DNA___________。由此可推測，CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的Cas9蛋白可能是切割病毒DNA___________鍵的酶。

Answer 1

【答案】 PCR 基因表達載體 感受態(tài) 抗原一抗體雜交 動物血清（或血漿） 抗體 滅活的病毒 胞吞 突變或降解 磷酸二酯

【解析】試題分析：本題考查了基因工程和細胞工程等有關(guān)知識，能夠掌握基因工程的操作步驟，識記基因工程的操作工具及作用，識記植物細胞融合和動物細胞融合的區(qū)別，能夠結(jié)合所學(xué)知識準確答題。

（1）PCR技術(shù)可以對DNA分子在體外進行大量復(fù)制，因此擴增HBV表面抗原基因，可以用PCR技術(shù)。方法Ⅰ中過程①需要構(gòu)建基因表達載體，導(dǎo)入到酵母菌體內(nèi)時，常用Ca2+處理使酵母菌成為感受態(tài)細胞，從而有利于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。從分子水平上檢測轉(zhuǎn)基因在酵母菌體內(nèi)是否表達成功，可以采用抗原-抗體雜交方法。

（2）方法Ⅱ中，培養(yǎng)細胞1時，培養(yǎng)液中除加入必要的營養(yǎng)物質(zhì)外，還需加入動物血清、血漿等一些天然成分。經(jīng)過選擇性培養(yǎng)得到的細胞2還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，再經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。植物細胞融合有物理法（離心、振動、電激等）和化學(xué)法（聚乙二醇），過程②是動物細胞融合，常用物理法（離心、振動、電激等）、化學(xué)法（聚乙二醇）、生物法（滅活的病毒），所以過程②特有的方法是用滅活的病毒處理。

（3）大分子進入細胞的方式是胞吐，因此借助納米脂質(zhì)顆粒將Cas9蛋白的mRNA和引導(dǎo)RNA通過胞吞方式送入肝細胞的。由圖可知，Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA組裝成 CRISPR/Ca59系統(tǒng)進入細胞核中，將整合在染色體上的乙肝病毒DNA進行基因編輯，使病毒DNA突變或降解。要使DNA分子斷裂，需要催化脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵水解，因此可推測，CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的Cas9蛋白可能是切割病毒DNA磷酸二酯鍵的酶。