Question

自然界中的兩種微生物，可以通過各自不同的作用將培養(yǎng)液中的葡萄糖轉(zhuǎn)化為維生素C，其過程如圖所示．在歐文氏菌中無2，5-二酮基-D-葡萄糖酸還原酶（2，5-DKG還原酶），不能將2，5-二酮基-D-葡萄糖酸轉(zhuǎn)化為2-二酮基-L-古龍酸；而棒狀桿菌不能直接轉(zhuǎn)化D-葡萄糖．通過基因工程技術(shù)，可以改造某種細(xì)菌，僅用一步發(fā)酵即可生成2-二酮基-L-古龍酸．請根據(jù)以上信息回答下列問題．

（1）利用基因工程技術(shù)可以改造上述兩種菌中的

 

菌，使其可直接利用D-葡萄糖生成2-二酮基-L-古龍酸．
（2）利用基因工程技術(shù)改造此細(xì)菌的基本方法是：先用

 

同時切割

 

和

 

，然后用DNA連接酶將上述切割產(chǎn)物連接，構(gòu)成

 

并將其導(dǎo)入到受體菌中．
（3）在獲得轉(zhuǎn)基因工程菌后，培養(yǎng)“工程菌”的培養(yǎng)基應(yīng)含有

 

等幾類營養(yǎng)物質(zhì)．欲純化此工程菌，可以采用

 

法將菌種接種在

 

培養(yǎng)基上，以獲得

 

菌落；進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)和獲得產(chǎn)品時，應(yīng)選用

 

培養(yǎng)基．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：基因工程是指按照人們的意愿，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品．
基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體（常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒）．
基因工程四步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測和表達(dá)．

解答： 解：（1）由于在歐文氏菌中無2，5-二酮基-D-葡萄糖酸還原酶，所以利用基因工程技術(shù)改造歐文氏菌，使其可直接利用D-葡萄糖生成2-二酮基-L-古龍酸．
（2）利用基因工程技術(shù)改造此細(xì)菌的基本方法是：先用同種限制性核酸內(nèi)切酶同時切割2，5-二酮基-D-葡萄糖酸還原酶基因和質(zhì)粒，然后用DNA連接酶將上述切割產(chǎn)物連接，構(gòu)成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入到受體菌中．
（3）培養(yǎng)“工程菌”的培養(yǎng)基應(yīng)含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽、生長因子等幾類營養(yǎng)物質(zhì)．可以采用劃線法或稀釋涂布法將菌種接種在固體培養(yǎng)基上，以獲得單個菌落，進(jìn)行純化；進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)和獲得產(chǎn)品時，應(yīng)選用液體培養(yǎng)基．
故答案為：
（1）歐文氏
（2）同種限制性核酸內(nèi)切酶    2，5-二酮基-D-葡萄糖酸還原酶基因（2，5-DKG還原酶基因）      質(zhì)粒     重組質(zhì)粒（重組DNA）
（3）碳源、氮源、水、無機(jī)鹽、生長因子     劃線（或稀釋涂布）   固體     單個     液體

點(diǎn)評：本題考查基因工程和微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、工具、操作過程；識記微生物培養(yǎng)的方法．