Question

【題目】為增加菊花的花色類型，研究者從其他植物的cDNA文庫(kù)中提取出花色基因C(圖1),擬將其與質(zhì)粒（圖2)重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花細(xì)胞中。圖3從上到下依次表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)。請(qǐng)分析回答：

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因C的原理是_____________。

（2）圖2所示質(zhì)粒被___________切割獲得的產(chǎn)物可與圖1所示基因C連接，理由是___________。

（3）經(jīng)BamHⅠ處理后構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞后，基因C不能表達(dá)，原因是質(zhì)粒酶切部位的兩端無(wú)，導(dǎo)致基因C不能_____________。

（4）在添加四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，___________(填“能”或“不能”）篩選出含有插入基因C的重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌單菌落，原因是_________________________。

Answer 1

【答案】 DNA雙鏈復(fù)制 BamHI和Sau3AI 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端 啟動(dòng)子和終止子 轉(zhuǎn)錄 不能 含質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌均含有抗四環(huán)素基因，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)

【解析】試題分析：試題分析：本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求學(xué)生識(shí)記基因工程的操作步驟及各步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能正確分析題圖，從圖中提取信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱理解和應(yīng)用層次的考查。基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因C的原理是DNA雙鏈復(fù)制。

（2）據(jù)圖3可知，由于BamHⅠ和Sau3AⅠ兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端，因此圖2所示質(zhì)粒被BamHⅠ和Sau3AⅠ切割獲得的產(chǎn)物可與圖1所示基因C連接。

（3）據(jù)圖可知，經(jīng)BamHⅠ處理后構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞后，基因C不能表達(dá)，原因是質(zhì)粒酶切部位的兩端無(wú)啟動(dòng)子和終止子，導(dǎo)致基因C不能轉(zhuǎn)錄。

（4）由于含質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌均含有抗四環(huán)素基因，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，所以在添加四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，不能篩選出含有插入基因C的重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌單菌落。