Question

【題目】為增強玉米抗旱性，研究者構(gòu)建含有某微生物抗旱基因E的重組質(zhì)粒，用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入玉米幼胚組織細胞中，獲得抗旱的轉(zhuǎn)基因玉米。下列相關(guān)敘述不正確的是

A.提取該微生物mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，通過PCR可獲得大量目的基因

B.將重組質(zhì)粒置于經(jīng)CaCl2處理的農(nóng)桿菌懸液中，可以獲得轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌

C.用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將E基因轉(zhuǎn)入玉米幼胚組織細胞需要嚴格進行無菌操作

D.用E蛋白的抗體進行抗原-抗體雜交，可在個體水平檢測轉(zhuǎn)基因玉米的抗旱性狀

Answer 1

【答案】D

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上。

A、提取組織mRNA進行逆轉(zhuǎn)錄后得到的cDNA可以作為PCR的模板，PCR技術(shù)體外擴增獲得大量目的基因，A正確；

B、用CaCl2處理農(nóng)桿菌，使其處于易于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的感受態(tài)，有利于目的基因?qū)�入受體細胞，B正確；

C、用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將E基因轉(zhuǎn)入玉米幼胚組織細胞進行植物組織培養(yǎng)時，需要嚴格無菌操作，保證無菌環(huán)境，C正確；

D、用E蛋白的抗體進行抗原-抗體雜交，檢測到玉米細胞中具有E蛋白基因，但E蛋白基因不一定能成功表達，因此培育出的玉米不一定具有抗旱能力，D錯誤。

故選D。