Question

生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應(yīng)用在一定程度上能夠減緩人類對(duì)化石燃料的消耗，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在微生物M（單細(xì)胞）產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油（如下圖1）。

1、篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時(shí)，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供             ，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是                法。

2、圖2是采用純化微生物M培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖。則獲得圖A效果的接種方法是           ，圖B效果的接種方法是             。

3、若需人工大量克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用___         _技術(shù)，該過程需要的特殊酶是             。

4、常用血球計(jì)數(shù)板（規(guī)格為1mm×1mm×0.1mm）分兩類，一類是每個(gè)計(jì)數(shù)室包括16個(gè)中格，每個(gè)中格包括25個(gè)小格，這種計(jì)數(shù)板抽樣計(jì)數(shù)時(shí)只要統(tǒng)計(jì)四個(gè)頂角的中格即可；另一類是是每個(gè)計(jì)數(shù)室包括25個(gè)中格，每個(gè)中格包括16個(gè)小格，這種計(jì)數(shù)板抽樣計(jì)數(shù)時(shí)除了統(tǒng)計(jì)四個(gè)頂角的中格外還要計(jì)數(shù)中央的一個(gè)中格。在實(shí)驗(yàn)中如需定期測定培養(yǎng)液中微生物M的細(xì)胞數(shù)量，則在取出的樣液中要立即加入固定液，其目的是              。如果將樣液稀釋100倍，采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，觀察到的計(jì)數(shù)室中細(xì)胞分布如圖2所示，則培養(yǎng)液中微生物M的 細(xì)胞密度為              個(gè)/L.

5、研究人員擬將某目的基因?qū)�入微生物M 細(xì)胞中，為此需要選擇合適的質(zhì)粒作為運(yùn)載體。下圖所示X－1、X－2、X－3、X－4為四種相關(guān)質(zhì)粒，其中Tc^r表示抗四環(huán)素的抗性基因，Ap^r表示青霉素抗性基因，E1和E2表示兩種限制酶的識(shí)別位點(diǎn)。基因工程中限制酶作用的化學(xué)鍵是                           。若將這四種質(zhì)粒分別導(dǎo)入微生物M，然后將微生物M菌液分別涂布在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上培養(yǎng)。則在這兩種培養(yǎng)基上均不能生長的M細(xì)胞類型有________________。

6、已知Tc^r長度為1.5kb(1kb=1000個(gè)堿基對(duì))，Ap^r長度為0.5kb。如果X－1用E1酶切，產(chǎn)生0.5kb堿基片段和8.5 kb堿基片段,那么質(zhì)粒X－2用E2酶切后的片段長度為_____________對(duì)堿基

 

Answer 1

【答案】

1、唯一碳源   高壓蒸汽滅菌

2、稀釋涂布平板法   平板劃線法

3、PCR  耐熱DNA聚合酶

4、防止細(xì)胞因自身的增殖周期而影響計(jì)數(shù)效果，因此要?dú)⑺拦潭ㄎ⑸�物M細(xì)胞。  10¹¹

5、磷酸二酯    無質(zhì)粒細(xì)胞    含X -3的細(xì)胞

6、10000

【解析】

試題分析：

1.植物油由c、h、o三種元素構(gòu)成，微生物通常以此作為碳源，培養(yǎng)基常規(guī)的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌；

2. 基因的擴(kuò)增通常采用PCR技術(shù)，需要耐熱DNA聚合酶；

3. 防止細(xì)胞因自身的增殖周期而影響計(jì)數(shù)效果，因此要加入固定液殺死固定微生物M細(xì)胞，每個(gè)計(jì)數(shù)室包括25個(gè)中格，每個(gè)中格包括16個(gè)小格，這種計(jì)數(shù)板抽樣計(jì)數(shù)時(shí)除了統(tǒng)計(jì)四個(gè)頂角的中格外還要計(jì)數(shù)中央的一個(gè)中格，則為5+4+4+4+3=20，常用血球計(jì)數(shù)板（規(guī)格為1mm×1mm×0.1mm），體積是0.1×0.1×0.1=1×10^-4，則細(xì)胞數(shù)為20×5×10000×100×1000=10¹¹,。

4. 基因工程中限制酶作用的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵，X-1用E2切可以在有青霉素的培養(yǎng)基上生長，X-2用E2切可以在有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，X-3不含有抗性基因都不能生長，X-4用E1切可以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，有E2切可以在有青霉素的培養(yǎng)基上生長。

5. 如果X－1用E1酶切，產(chǎn)生0.5kb堿基片段和8.5 kb堿基片段，總長為9Kb，Ap^r長度為0.5kb，所以剩余8.5Kb，Tc^r長度為1.5kb，所以X-2是8.5+1.5=9Kb。

考點(diǎn)：本題考查微生物的培養(yǎng)和細(xì)胞工程、基因工程相關(guān)知識(shí)，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問題。