Question

紅細(xì)胞含有大量的血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶氧氣或二氧化碳．我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來(lái)提取和分離血紅蛋白，請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：
（1）血紅蛋白提取和分離的程序可分為四步：

 

、

 

、

 

和

 

．
（2）第一步即是樣品處理，它包括

 

、

 

、分離血紅蛋白溶液．
（3）收集的血紅蛋白溶液在透析袋中進(jìn)行透析，這就是樣品的粗分離．透析過(guò)程中為了較為徹底地除去樣品中的小分子雜質(zhì)，可以采用

 

的方法．
（4）然后通過(guò)

 

將樣品進(jìn)一步純化，最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定．血紅蛋白有什么特點(diǎn)？

 

．這一特點(diǎn)對(duì)進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離純化有什么意義？

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：蛋白質(zhì)的提取和分離

專題：

分析：血紅蛋白的提取和分離一般的一般步驟是樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定，凝膠色譜法純化蛋白質(zhì)的原理是相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠柱時(shí)移動(dòng)的速度不同，相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外移動(dòng)，路程短，移動(dòng)速度快，先被洗脫出來(lái)，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)擴(kuò)散進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，通過(guò)凝膠柱的路程長(zhǎng)，移動(dòng)速度慢，洗脫的次序靠后．

解答： 解：（1）血紅蛋白的提取和分離一般分為4步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定．
（2）第一步即是樣品處理，它包括紅細(xì)胞洗滌、血紅蛋白釋放、分離血紅蛋白溶液．
（3）①透析即是血紅蛋白的粗分離，透析的目的是除去分子量較小的雜蛋白，為了較為徹底地除去樣品中的小分子雜質(zhì)，可以采用反復(fù)透析的方法．
（4）樣品的純化是通過(guò)膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，血紅蛋白呈紅色，在凝膠色譜分離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液，使血紅蛋白的分離過(guò)程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作程序．
故答案為：
（1）樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定．
（2）紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放
（3）反復(fù)透析（多次更換透析液）
（4）凝膠色譜法     血紅蛋白呈現(xiàn)紅色     血紅蛋白呈現(xiàn)紅色，在凝膠色譜分離時(shí)，可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集流出液（待紅色蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)收集流出液）

點(diǎn)評(píng)：對(duì)血紅蛋白的提取和分離的實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)原理和具體操作方法的掌握是本題考查的重點(diǎn)．