Question

20．我國一科研團(tuán)隊(duì)將小麥液泡膜Na⁺/K⁺逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因（TaNHX2基因）轉(zhuǎn)移到水稻細(xì)胞內(nèi)，獲得了轉(zhuǎn)基因耐鹽水稻新品種．回答下列有關(guān)問題：
（1）為保證目的基因在水稻細(xì)胞中能夠表達(dá)，運(yùn)載體上應(yīng)含有特定的B．
A．復(fù)制原點(diǎn)              B．啟動子           C．標(biāo)記基因
（2）水稻的轉(zhuǎn)化過程為：將水稻幼胚接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)過脫分化過程，培養(yǎng)出愈傷組織，然后用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將目的基因和相關(guān)功能片段整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA上，最后誘導(dǎo)愈傷組織形成水稻植株．
（3）為驗(yàn)證外源基因整合到水稻基因組后是否轉(zhuǎn)錄，可從轉(zhuǎn)基因植株的細(xì)胞中提取所有mRNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA（互補(bǔ)DNA），再以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，利用TaNHX2基因特異引物，通過PCR方法進(jìn)行基因擴(kuò)增．若以根細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陽性（有產(chǎn)物生成），以葉細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陰性（無產(chǎn)物生成），則說明目的基因（TaNHX2基因）僅在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄．
（4）將生長至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的 NaCl溶液中培養(yǎng)，進(jìn)行耐鹽試驗(yàn)，用非轉(zhuǎn)基因幼苗作為對照．培養(yǎng)30天后觀察現(xiàn)象，若轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株（轉(zhuǎn)基因植株葉片不變黃，非轉(zhuǎn)基因植株葉片變黃，其它答案合理可給分）則說明轉(zhuǎn)基因植株獲得了耐鹽特性．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因表達(dá)是指轉(zhuǎn)錄和翻譯形成蛋白質(zhì)，其中轉(zhuǎn)錄是由啟動子啟動的，因此為保證目的基因在水稻細(xì)胞中能夠表達(dá)，運(yùn)載體上應(yīng)含有特定的啟動子．
（2）愈傷組織是外植體經(jīng)過脫分化過程形成的；將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA（互補(bǔ)DNA）；PCR技術(shù)可在體外擴(kuò)增基因； 若以根細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陽性（有產(chǎn)物生成），以葉細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陰性（無產(chǎn)物生成），則說明目的基因（TaNHX2基因）僅在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄．
（4）將生長至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的NaCl溶液中培養(yǎng)，進(jìn)行耐鹽試驗(yàn)，用非轉(zhuǎn)基因幼苗作為對照，培養(yǎng)30天后觀察現(xiàn)象．若轉(zhuǎn)基因植株獲得了耐鹽特性，則轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株（轉(zhuǎn)基因植株葉片不變黃，非轉(zhuǎn)基因植株葉片變黃，其它答案合理可給分）．
故答案為：
（1）B
（2）脫分化   農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）cDNA（互補(bǔ)DNA）   PCR     目的基因（TaNHX2基因）僅在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄
（4）轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株（轉(zhuǎn)基因植株葉片不變黃，非轉(zhuǎn)基因植株葉片變黃，其它答案合理可給分）

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．