Question

【題目】根據(jù)基因工程的有關(guān)知識,回答下列問題。

(1)限制酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段,其末端類型有：__________和_____________。

(2)質(zhì)粒用EcoR Ⅰ切割后產(chǎn)生的片段如下:

AATTC……G

G……CTTAA

為使載體與目的基因相連,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割,該酶必須具有的特點(diǎn)是_______________。

(3)實(shí)際操作中,往往用EcoRⅠ和另一種限制性內(nèi)切酶同時分別切割質(zhì)粒和外源DNA分子,其優(yōu)點(diǎn)在于可防止____。

(4)按其來源不同,基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類,即___DNA連接酶和___DNA連接酶。

(5)基因工程中除質(zhì)粒外,___和___也可作為載體。

Answer 1

【答案】黏性末端 平末端 切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同 質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化 E·coli T4 動植物病毒 λ噬菌體的衍生物

【解析】

基因工程技術(shù)的基本工具：

（1）“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）

①來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。

②功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。

③結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。

（2）“分子縫合針”——DNA連接酶

（3）“分子運(yùn)輸車”——載體

①載體具備的條件：能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存；具有一至多個限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入；具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。

②最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。

③其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。

（1）限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生兩種類型的末端，即黏性末端和平末端。

（2）根據(jù)題意分析，質(zhì)粒可以用EcoRⅠ切割，也可以用另一種限制酶切割，說明該酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同。

（3）根據(jù)題意分析，用不同的限制酶同時分別切割質(zhì)粒和外源DNA分子,可以防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，進(jìn)而使得目的基因準(zhǔn)確插入質(zhì)粒。

（4）基因工程使用的DNA連接酶按來源分，可分為E·coli DNA連接酶和T4DNA連接酶。

（5）基因工程常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、動植物病毒和λ噬菌體的衍生物。