Question

14．繼哺乳動(dòng)物乳腺發(fā)生器研發(fā)成功后，膀胱生物發(fā)生器的研究也取得了一定進(jìn)展．最近，科學(xué)家培養(yǎng)出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中．請(qǐng)回答：
（1）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
（2）進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因?qū)�入受精卵（早期胚胎）（�?xì)胞）中．
（3）通常采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)使外源基因在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中特異表達(dá)．
（5）載體經(jīng)EcoRI（一種限制性核酸內(nèi)切酶）切割后所形成的黏性末端之一是，則EcoRI的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G↓GATCC-（切點(diǎn)用箭頭標(biāo)在序列上）．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
（2）由于受精卵（或早期胚胎細(xì)胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞表達(dá)，因此進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入受精卵（或早期胚胎）中．
（3）檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組通常采用DNA分子雜交技術(shù)．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)在目的基因前加入膀胱組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中特異表達(dá)．
（5）經(jīng)EcoRI切割后所形成的黏性末端之一是，則EcoRI的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G↓GATCC-．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建     
（2）受精卵（早期胚胎）
（3）DNA分子雜交     
（4）膀胱上皮    
（5）-G↓GATCC-

點(diǎn)評(píng) 本題綜合考查基因工程技術(shù)方面的知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟及應(yīng)用；識(shí)記目的基因檢測(cè)與鑒定的方法；明確動(dòng)物受體細(xì)胞運(yùn)用顯微注射法，并能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．