Question

14．有人嘗試制備始旋鏈霉菌（能生產(chǎn)普那霉素的一種原核放線菌）的原生質(zhì)體，并利用其孢子和原生質(zhì)體進(jìn)行選育普那霉素高產(chǎn)菌株的實(shí)驗(yàn)．采用酶解法制備始旋鏈霉菌原生質(zhì)體時(shí)，先要明確酶解時(shí)間與原生質(zhì)體制備效果間的關(guān)聯(lián)．探究步驟如下：
第1步：取生長旺盛的始旋鏈霉菌菌絲，酶解后用一定量的緩沖液稀釋后涂布在平板上，30℃培養(yǎng)7天后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)．
第2步：計(jì)算時(shí)間對原生質(zhì)體制備和再生的影響，繪制成下圖1所示曲線．
請據(jù)圖回答：

（1）本實(shí)驗(yàn)所用的酶，不適用于制備BC的原生質(zhì)體．
A．大腸桿菌細(xì)胞  B．番茄葉肉細(xì)胞 C．酵母菌
（2）鑒定原生質(zhì)體制備效果的常見方法是將部分原生質(zhì)體放在低滲（“等滲”、“高滲”或“低滲”）溶液中，觀察其形態(tài)變化．而原生質(zhì)體的計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)常借助光學(xué)顯微鏡、蓋玻片和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等光學(xué)儀器．
（3）上述實(shí)驗(yàn)的第1步中，酶解后的稀釋必須用緩沖液的原因是維持酶解后的原生質(zhì)體的正常形態(tài)和功能，若未經(jīng)稀釋，直接涂布可能造成的結(jié)果是平板上菌落會重疊影響統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)．
（4）根據(jù)上圖1可見，隨著酶解時(shí)間增加，原生質(zhì)體的再生率變化趨勢是逐漸下降．結(jié)合酶解時(shí)間對原生質(zhì)體制備率和再生率的影響，應(yīng)當(dāng)選擇的最佳酶解時(shí)間約為90min．
（5）用紫外線分別處理始旋鏈霉菌孢子、原生質(zhì)體后，統(tǒng)計(jì)各組菌株的普那霉素產(chǎn)量，結(jié)果如上圖2．誘變后效果最好的是丙組，可能的原因是原生質(zhì)體培養(yǎng)過程中細(xì)胞分裂旺盛，紫外線引起突變的概率大．

Answer 1

分析 分析圖1：隨著酶解時(shí)間增加，原生質(zhì)體的再生率變化趨勢是逐漸下降，80min后原生質(zhì)體的再生率保持一段時(shí)間穩(wěn)定，但是原生質(zhì)體的制備率仍在增加．
分析圖2：誘變后效果最好的是丙組．

解答 解：（1）由題干分析可知，始旋鏈霉菌是一種原核生物，真菌、原核生物和植物細(xì)胞壁的成分不同，因此，本實(shí)驗(yàn)所用的酶不適用于制備植物和酵母菌的原生質(zhì)體．
（2）觀察其原生質(zhì)體的破裂情況，可將自備的原生字體放在低滲溶液中觀察其吸水脹破的情況，原生質(zhì)體的計(jì)數(shù)可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行．
（3）酶解后的稀釋用的緩沖液應(yīng)為原生質(zhì)體的等滲溶液，以便于保存其完整的形態(tài)；不經(jīng)稀釋直接涂布，則可能軍也較多易導(dǎo)致菌落粘連而影響計(jì)數(shù)．
（4）由圖1可知隨著酶解時(shí)間增加，原生質(zhì)體的再生率變化趨勢是逐漸下降，80min后原生質(zhì)體的再生率保持一段時(shí)間穩(wěn)定，但是原生質(zhì)體的制備率仍在增加，因此較80min而言，90min較適宜．
（5）誘變后效果最好的是丙組，可能的原因是原生質(zhì)體培養(yǎng)過程中細(xì)胞分裂旺盛，紫外線引起突變的概率大（沒有細(xì)胞壁阻擋，紫外線衰減少）．
故答案為：
（1）BC
（2）低滲     血細(xì)胞計(jì)數(shù)板（血球計(jì)數(shù)板）
（3）維持酶解后的原生質(zhì)體的正常形態(tài)和功能         平板上菌落會重疊影響統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)
（4）逐漸下降（或99min前下降速度逐漸減慢，90min后逐漸下降）      90
（5）原生質(zhì)體培養(yǎng)過程中細(xì)胞分裂旺盛，紫外線引起突變的概率大（沒有細(xì)胞壁阻擋，紫外線衰減少）

點(diǎn)評 本題主要考查原生質(zhì)體制備的相關(guān)知識，對學(xué)生審題和圖形分析能力要求較高．