Question

16．埃博拉病毒（EBO）中EBOV是一種烈性的、泛嗜性的病毒，它首先破壞吞噬細(xì)胞，其次是肝、脾等細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致血管通透性增加，出現(xiàn)嚴(yán)重的出血熱現(xiàn)象．目前尚無針對(duì)該病毒的特效藥或疫苗．
（1）EBOV感染者的血清中很難形成高濃度抗體，這是因?yàn)椴《咀钕惹秩静⑵茐木奘杉?xì)胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生．
（2）較難制作EBO疫苗的原因與其遺傳物質(zhì)的種類以及表達(dá)方式有關(guān)．EBO病毒容易變異，這是因?yàn)镽NA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差．
（3）如圖1示利用“細(xì)胞技術(shù)”研制抗擊EBO的藥物與疫苗：

過程①獲得的甲細(xì)胞是B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞細(xì)胞；圖中所用瘤細(xì)胞的作用是能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體．要獲得純凈的單一品種抗體，上述操作的要點(diǎn)是一個(gè)淋巴細(xì)胞和一個(gè)瘤細(xì)胞結(jié)合．
（4）還可以利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)EBO蛋白疫苗．EBO結(jié)構(gòu)和基因組如圖2所示．EBO衣殼外的包膜上有5種蛋白棘突（包括GP蛋白和VP系列蛋白），其中GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別．該技術(shù)的目的基因是GP蛋白基因

（5）腺病毒（基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因）具有弱致病性，但病毒在人體細(xì)胞內(nèi)增殖會(huì)導(dǎo)致正細(xì)胞裂解、死亡．因此，需要對(duì)腺病毒進(jìn)行改造．如圖3所示腺病毒基因組、轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)EBO蛋白疫苗與重組病毒粒子疫苗的基本過以EBO病毒包膜蛋白作為疫苗比較安全的原因是蛋白質(zhì)不能侵染細(xì)胞，不破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)．生產(chǎn)含目的基因重組病毒粒子作為目的基因的運(yùn)載體，優(yōu)點(diǎn)是能侵染細(xì)胞運(yùn)載目的基因；為保障安全，基因重組病毒粒子需要除去自身原本的一些基因，改用輔助質(zhì)粒攜帶這些基因．則除去的基因主要是復(fù)制基因E和衣殼蛋白兩類基因．
（6）輔助質(zhì)粒攜帶EBO病毒上的這些基因，與EBO攜帶一樣，均能在真核細(xì)胞中表達(dá)，說明單個(gè)基因的表達(dá)與其所在載體無關(guān)．

Answer 1

分析 分析圖1：圖1表示單克隆抗體的制備過程，其中①表示獲取漿細(xì)胞的過程；②表示細(xì)胞融合過程；③表示利用雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)單克隆抗體．
分析圖2：EBO衣殼外有包膜，包膜上有5種蛋白棘突，其中GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別．右圖是EBO基因組；
分析圖3：左圖是腺病毒基因組，其中基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因．右圖表示轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)EBO蛋白疫苗與重組病毒粒子疫苗的基本過程．

解答 解：（1）根據(jù)題干信息“首先破壞吞噬細(xì)胞”可知，EBOV感染者的血清中很難形成高濃度的抗體的原因是病毒最先侵染并破壞巨噬細(xì)胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生．
（2）EBO病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，而RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差，容易變異，因此較難制作EBO疫苗．
（3）圖1表示單克隆抗體的制備過程，其中過程①表示給小鼠注射特定抗原，進(jìn)而獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞，即圖中甲細(xì)胞；過程②是將漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的過程；漿細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，但在體外培養(yǎng)條件下不能無限增殖，因此所用瘤細(xì)胞的作用是能不斷分裂，提高抗體的產(chǎn)量．要獲得純凈的單一品種抗體，上述操作的要點(diǎn)是一個(gè)淋巴細(xì)胞與一個(gè)腫瘤細(xì)胞結(jié)合．
（4）根據(jù)題干信息“GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別”可知，該技術(shù)的目的基因是G蛋白基因．
（5）以EBO病毒包膜蛋白作為疫苗比較安全，原因是蛋白質(zhì)不具侵染性，不會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)；但蛋白質(zhì)不能復(fù)制，因此疫苗量較少，引起的免疫反應(yīng)效果較弱．生產(chǎn)含目的基因重組病毒粒子作為目的基因的運(yùn)載體，其優(yōu)點(diǎn)是能通過主動(dòng)侵染細(xì)胞運(yùn)載目的基因；根據(jù)題干信息“基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因”可知，為保障安全，基因重組病毒粒子需要除去復(fù)制基因E和衣殼蛋白兩類基因．
（6）輔助質(zhì)粒攜帶EBO病毒上的這些基因，與EBO攜帶一樣，均能在真核細(xì)胞中表達(dá)，說明單個(gè)基因的表達(dá)與其所在載體無關(guān)．
圖6中neo是新霉素抗性基因，amp表示氨芐青霉素抗性基因，ori是質(zhì)粒的復(fù)制子，限制酶BamHⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ作用位點(diǎn)如下圖7．
故答案為：
（1）病毒最先侵染并破壞巨噬細(xì)胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生   
（2）RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差   
（3）B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞     能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體   一個(gè)淋巴細(xì)胞和一個(gè)瘤細(xì)胞結(jié)合   
（4）GP蛋白基因    
（5）蛋白質(zhì)不能侵染細(xì)胞，不破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)   能侵染細(xì)胞運(yùn)載目的基因   復(fù)制基因E和衣殼蛋白   
（6）單個(gè)基因的表達(dá)與其所在載體無關(guān)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具、操作步驟，掌握各步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合圖中和題中信息準(zhǔn)確答題，綜合性較強(qiáng)，有一定難度．