Question

【題目】硒是一種生命必需的微量元素。亞硒酸鈉對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)有明顯的毒害作用，土壤中的一些富硒細(xì)菌可將其還原為紅色單質(zhì)硒。下圖為土壤中富硒細(xì)菌的篩選和純化過(guò)程�；卮鹣铝袉�(wèn)題。

（1）若②中出現(xiàn)_________的現(xiàn)象，則說(shuō)明培養(yǎng)基中的亞硒酸鈉被細(xì)菌還原。

（2）梯度稀釋的目的是_________。 將細(xì)菌從④接種至⑤應(yīng)采用_________法。

（3）固定化富硒菌一般采用_________法。采用凝膠色譜法分離純化還原亞硒酸鈉的酶時(shí)，先從層析柱中洗脫出來(lái)的是相對(duì)分子質(zhì)量較___________的蛋白質(zhì)。

（4）研究人員篩選出--種只有較強(qiáng)富硒能力的菌株，現(xiàn)欲通過(guò)觀察菌落來(lái)判斷菌株對(duì)亞硒酸鈉的耐受值，請(qǐng)將下列實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充完整:

①配制系列濃度梯度的亞硒酸鈉________（填“液體”或“固體”）培養(yǎng)基；

②向培養(yǎng)基中分別接種___________的該菌株菌液，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間；

③觀察菌落生長(zhǎng)情況，________的培養(yǎng)基對(duì)應(yīng)的最高亞硒酸鈉濃度即為該菌株的最高耐受值。

Answer 1

【答案】培養(yǎng)基變紅 使聚集在一起的細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落 平板劃線 包埋 大 固體 等量 有菌落生長(zhǎng)

【解析】

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，常用到培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動(dòng)物（或組織）生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。選擇培養(yǎng)基是指一類根據(jù)特定微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某理化因素抗性的原理而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。具有只允許特定的微生物生長(zhǎng)，而同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的功能。凝膠色譜法（分配色譜法）原理：分子量大的分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液（梯度稀釋），盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開(kāi)，使成單個(gè)細(xì)胞存在。

（1）培養(yǎng)液中有亞硒酸鈉，若培養(yǎng)基中有富硒細(xì)菌，可將亞硒酸鈉還原為紅色單質(zhì)硒。

（2）梯度稀釋的目的是使聚集在一起的細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。 將細(xì)菌從④接種至⑤，為挑取單菌落接種至另一培養(yǎng)基，應(yīng)采用平板劃線法。

（3）細(xì)菌體積大，一般不容易從包埋材料中漏出，因此固定化富硒菌一般采用包埋法。采用凝膠色譜法分離純化還原亞硒酸鈉的酶時(shí)，先從層析柱中洗脫出來(lái)的是相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)。

（4）①題干欲通過(guò)觀察菌落來(lái)判斷菌株對(duì)亞硒酸鈉的耐受值，因此應(yīng)配制系列濃度梯度的亞硒酸鈉固體培養(yǎng)基。②利用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的等量原則，向培養(yǎng)基中分別接種等量的該菌株菌液，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間。③因?yàn)閬單�酸鈉對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)有明顯的毒害作用，因此觀察菌落生長(zhǎng)情況，有菌落生長(zhǎng)的培養(yǎng)基對(duì)應(yīng)的最高亞硒酸鈉濃度即為該菌株的最高耐受值。