Question

【題目】人肺細(xì)胞中的let -7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let -7基因?qū)�人肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖：

請(qǐng)回答：

(1)理論上，基因組文庫(kù)含有生物的_______基因；而cDNA文庫(kù)中含有生物的_______基因。

(2)進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需用__________酶切開(kāi)載體以插入let -7基因；載體應(yīng)含有啟動(dòng)子序列，該序列的作用為__________；有時(shí)候被切開(kāi)的載體并沒(méi)有插入let -7基因而形成空載的載體，此時(shí)可用含有_______序列的引物對(duì)載體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并通過(guò)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物來(lái)篩選出重組載體。

(3)圖中對(duì)肺癌組織塊的處理應(yīng)是__________，進(jìn)行過(guò)程②時(shí)，需用胰蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞以避免出現(xiàn)_________現(xiàn)象，從而有利于傳代培養(yǎng)。

Answer 1

【答案】全部 部分 限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶） （提供RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合位點(diǎn)并）開(kāi)啟目的基因的轉(zhuǎn)錄 let -7基因 先剪碎再用胰蛋白酶處理 接觸抑制

【解析】

基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)，基因組文庫(kù)中包含了某種生物的所有基因，cDNA文庫(kù)含有該種生物的部分基因，也叫部分基因文庫(kù)。過(guò)程①表示基因工程操作步驟中基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過(guò)程中需要用限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)載體進(jìn)行切割，以便于目的基因的插入；過(guò)程②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，傳代時(shí)用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，隨后分裝到新的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。

(1)基因組文庫(kù)含有生物的全部基因，而cDNA文庫(kù)中含有生物的部分基因。

(2)進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需用限制性核酸內(nèi)切酶切開(kāi)載體以插入let -7基因；載體含有啟動(dòng)子序列，啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，RNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn)，可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程；有時(shí)候被切開(kāi)的載體并沒(méi)有插入let -7基因而形成空載的載體，此時(shí)可用含有let -7基因序列的引物對(duì)載體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并通過(guò)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物來(lái)篩選出重組載體。

(3)圖中對(duì)肺癌組織塊的處理應(yīng)是先剪碎再用胰蛋白酶處理，進(jìn)行過(guò)程②時(shí)，需用胰蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞以避免出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，從而有利于傳代培養(yǎng)。