Question

12．我國目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質(zhì)（S蛋白，對應(yīng)的基因?yàn)镾基因），請回答下列問題．
（1）在這項(xiàng)技術(shù)中，S基因?qū)儆谀康幕�因．為在短時間內(nèi)大量獲得S基因，可用的技術(shù)是PCR技術(shù)，其原理是DNA雙鏈復(fù)制．
（2）用同種限制酶處理S基因和載體，并用DNA連接酶使之結(jié)合，這里的DNA片段兩兩結(jié)合的產(chǎn)物有3種，除了S基因，構(gòu)建好的表達(dá)載體還應(yīng)具有啟動子、終止子、標(biāo)記基因等結(jié)構(gòu)．
（3）將表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞，篩選得到工程細(xì)胞．使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)工程細(xì)胞時，通常需要加入動物血清等天然成分．工程細(xì)胞在生長過程中有貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中，定期收集培養(yǎng)液，分離純化即可得到所需產(chǎn)品．
（4）由于哺乳動物細(xì)胞嬌嫩挑剔，培養(yǎng)較難，成本較高，近些年科學(xué)家們又發(fā)明了“乳腺生物發(fā)生器”，從飼養(yǎng)的轉(zhuǎn)基因動物分泌的乳汁中提取所需產(chǎn)品．在這種技術(shù)中，構(gòu)建表達(dá)載體時需要將S基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件重組在一起，并將表達(dá)載體通過顯微注射的方式，導(dǎo)入哺乳動物的受精卵（填細(xì)胞名稱）．

Answer 1

分析 DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
由于基因的選擇性表達(dá)，在利用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物時，要將藥用蛋白基因和乳腺組織特異性表達(dá)的啟動子等調(diào)控組件重組在一起．
動物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
動物細(xì)胞培養(yǎng)關(guān)鍵詞辨析：
1、細(xì)胞貼壁：培養(yǎng)時，懸液中的細(xì)胞會很快貼附在瓶壁上．
2、細(xì)胞的接觸抑制：細(xì)胞表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖．

解答 解：（1）在基因工程技術(shù)中，S基因?qū)儆谀康幕�因．為在短時間內(nèi)大量獲得S基因，可用的技術(shù)是PCR技術(shù)，其原理是DNA雙鏈復(fù)制．
（2）在基因表達(dá)載體構(gòu)建的過程中，要用同一種限制酶處理S基因和運(yùn)載體，并用DNA連接酶使之結(jié)合．由于目的基因和運(yùn)載體均具有相同黏性末端，因此這里的DNA片段兩兩結(jié)合的產(chǎn)物有目的基因自身連接、運(yùn)載體自身連接和重組質(zhì)粒3種，除了S基因，構(gòu)建好的表達(dá)載體還應(yīng)具有啟動子、終止子、標(biāo)記基因等結(jié)構(gòu)．
（3）在對工程細(xì)胞進(jìn)行動物細(xì)胞過程中，培養(yǎng)基中通常需要加入動物血清等天然成分．細(xì)胞在生長過程中有貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理使細(xì)胞分散，以便于分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中，定期收集培養(yǎng)液，分離純化即可得到所需產(chǎn)品．
（4）由于哺乳動物細(xì)胞嬌嫩挑剔，培養(yǎng)較難，成本較高，近些年科學(xué)家們又發(fā)明了從飼養(yǎng)的轉(zhuǎn)基因動物分泌的乳汁中提取所需產(chǎn)品．在“乳腺生物發(fā)生器”的技術(shù)中，構(gòu)建表達(dá)載體時需要將S基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件重組在一起；一般動物細(xì)胞工程利用受精卵作為受體細(xì)胞，可以通過顯微注射法將表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵．
故答案為：
（1）目的基因　PCR技術(shù)　DNA雙鏈復(fù)制
（2）同種限制酶　DNA連接酶　3　啟動子、終止子、標(biāo)記基因
（3）動物血清　貼壁生長和接觸抑制　胰蛋白
（4）乳腺蛋白基因的啟動子　顯微注射　受精卵

點(diǎn)評 本題考查了基因工程以及細(xì)胞工程的相關(guān)知識，考生要識記基因工程的相關(guān)操作工具；識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分以及細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)；識記動物基因工程的過程等相關(guān)知識，難度適中．