Question

【題目】以下是有關(guān)現(xiàn)代生物科技的兩個問題，請回答:

I.下面是與動物細胞工程有關(guān)的問題，請分析回答：

（1）在進行動物細胞培養(yǎng)時，首先要將動物組織剪碎，然后用_____處理，以使其分散成_____，制成細胞懸液。

（2）氣體環(huán)埃中 CO2 的作用是_____。

（3）應(yīng)用于核移植的供體細胞一般選用傳代 10 代以內(nèi)的細胞，原因是 10 代以后細胞可能發(fā)生_________。

（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，具有_____的特點。單克隆抗體的制備過程需要經(jīng)過選擇性培養(yǎng)獲得雜交瘤細胞，還需進行_________和_____，經(jīng)過多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。

II 轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如下圖所示，圖中 PstI、SmaI、EcoRI，ApaI 等為限制質(zhì)粒和抗病基因上的箭頭表示限制酶的切割位點。下圖表示四種限制酶的識別序列及酶切點。

限制酶	PstI	SmaI	EcoRI	ApaI
識別序列 及酶切位點	—CTGCA↓G— —G↑ACGTC—	—CCC↓GGG— —GGG↑CCC—	—G↓AATTC— —CTTAA↑G—	—GGGCC↓C— —C↑CCGGG—

（1）若要獲得抗病基因，能否用限制酶 SmaI 對圖中對應(yīng)的位點進行切割？_________。要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒能否用 PstI、ApaI 限制酶切割質(zhì)粒？_____。

（2）卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，根據(jù)這一原理可以利用含卡那霉素的培養(yǎng) 基篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的香蕉細胞。由此推斷重組質(zhì)粒中應(yīng)含有_____基因，作為標記基因。

（3）②、③階段是否可使用同種培養(yǎng)基?___________。

Answer 1

【答案】胰蛋白酶 單個細胞 維持培養(yǎng)液 pH 遺傳物質(zhì)的突變 特異性強，靈敏度高 克隆化培養(yǎng) 抗體檢測 不能 不能 抗卡那霉素 不能

【解析】

1、動物細胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2、分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中SmaⅠ酶的切割位點位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點。所以要活動重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進行切割。①→②表示脫分化過程、②→③表示再分化過程、④是新植體。

Ⅰ．（1）在進行動物細胞培養(yǎng)時，首先要將動物組織剪碎，然后用胰蛋白酶處理，以使其分散成單個細胞，制成細胞懸液。
（2）氣體環(huán)境中CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH。
（3）應(yīng)用于核移植的供體細胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細胞，原因是10代以后細胞沒有發(fā)生遺傳物質(zhì)的突變，能保持正常的二倍體核型。
（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，優(yōu)點是：特異性強，靈敏度高，可大量制備。經(jīng)過選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細胞，還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，才能獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。

Ⅱ．（1）因為限制酶SmaⅠ的切割位點位于抗病基因上，對SmaⅠ位點進行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ對圖中對應(yīng)的位點進行切割．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，也不能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割質(zhì)粒，因為含有抗病基因的外源DNA分子上沒有ApaⅠ限制酶切割位點。
（2）欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時含有抗卡那霉素基因，作為標記基因。
（3）決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要。②、③階段培養(yǎng)基中生長素與細胞分裂素的比值不同，因此這兩個階段不能是用同種培養(yǎng)基。