Question

煙草花葉病毒(TMV)是一種在煙草及蔬菜等經(jīng)濟(jì)作物中廣泛傳播的病毒，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法將煙草花葉病毒外殼蛋白基因(CP基因)導(dǎo)入煙草并在轉(zhuǎn)化的煙草植株中表達(dá)，使其獲得對(duì)煙草花葉病毒的抗性。下圖是轉(zhuǎn)化煙草植株的培育流程，請(qǐng)回答：

(1)含有CP基因的cDNA文庫(kù)是通過(guò)將TMV的RNA進(jìn)行 獲得的。在對(duì)cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，設(shè)計(jì)的引物自身不能含有 序列。

(2)將CP基因?qū)�入土壤農(nóng)桿菌質(zhì)粒的 ，其原因是 __________________

_________________________________________________________________ 。

(3)含重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌與煙草葉共培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)煙草葉的處理要求是 ________________________________________。

(4)用含重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌感染煙草葉成功后，共培養(yǎng)形成愈傷組織時(shí)的培養(yǎng)條件是必須 。

(5)在誘導(dǎo)芽、根的培養(yǎng)基中需添加 才能進(jìn)行篩選，并要注意在不同的培養(yǎng)階段需調(diào)整 的比例。

 

Answer 1

(1)反轉(zhuǎn)錄 互補(bǔ)

(2)T-DNA區(qū) T-DNA可以從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并穩(wěn)定整合到植物染色體的DNA中

(3)無(wú)菌，并切成小片

(4)遮光

(5)卡那霉素和氨芐青霉素 生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素

【解析】(1)cDNA文庫(kù)是通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得的，引物自身不能含有互補(bǔ)序列。(2)CP基因可導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌質(zhì)粒的T-DNA區(qū)，因?yàn)門-DNA可以從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并穩(wěn)定整合到植物染色體的DNA中。 (3)在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，有時(shí)需對(duì)外植體進(jìn)行無(wú)菌處理并切成小片，以增加組織細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收速度。(4)誘導(dǎo)形成愈傷組織時(shí)必須遮光，防止出現(xiàn)再分化。(5)重組質(zhì)粒具有卡那霉素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因，所以需要在培養(yǎng)基中添加卡那霉素和氨芐青霉素進(jìn)行篩選。同時(shí)，植物組織培養(yǎng)過(guò)程中要注意在不同培養(yǎng)階段調(diào)整生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例，以供植物不同發(fā)育時(shí)期的需要。