Question

賴氨酸是人體必需氨基酸之一，可促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫力．乙圖為賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆牛的培育流程，其中字母表示相應(yīng)的操作過程．請回答：

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程如甲圖所示，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ為四種限制酶，該過程中所使用的限制酶是

 

和

 

，除限制酶外，該過程還需要的工具酶有

 

．基因表達(dá)載體除圖示結(jié)構(gòu)外，還應(yīng)含有

 

和

 

終止子等結(jié)構(gòu)．
（2）為了獲得較多的卵母細(xì)胞需要對供體注射

 

，卵母細(xì)胞要培養(yǎng)至

 

時(shí)期，才具備受精能力．
（3）胚胎成纖維細(xì)胞在培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)

 

和

 

現(xiàn)象，分瓶時(shí)需用

 

  處理以得到細(xì)胞懸液，進(jìn)而進(jìn)行

 

培養(yǎng)使細(xì)胞增殖．
（4）圖乙中a、b過程利用的主要生物技術(shù)有

 

和

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過程

專題：

分析：1）分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，其中SmaⅠ酶的切割位點(diǎn)位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點(diǎn)．所以要活動重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進(jìn)行切割．
2）卵母細(xì)胞的采集主要方法是：用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵，然后，從輸卵管中沖取卵子，直接與獲能的精子體外受精．還可以從已屠宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞，或者直接從活體動物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞，叫活體采卵．采集的卵母細(xì)胞，都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期后，才能與獲能的精子受精．
3）動物體細(xì)胞核移植的過程：如高產(chǎn)奶牛（提供體細(xì)胞）進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；同時(shí)采集卵母細(xì)胞，在體外培養(yǎng)到減二分裂中期的卵母細(xì)胞，去核（顯微操作）；將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞；通過電刺激使兩細(xì)胞融合，供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎；將胚胎移入受體（代孕）母牛體內(nèi)；生出與供體奶牛遺傳基因相同的犢牛．

解答： 解：（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，但限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)位于抗病基因上，對SmaⅠ位點(diǎn)進(jìn)行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ對圖中對應(yīng)的位點(diǎn)進(jìn)行切割．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)選用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割質(zhì)粒．重組質(zhì)粒時(shí)，還需要DNA連接酶連接目的基因和質(zhì)粒切口．基因表達(dá)載體包括目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因+復(fù)制原點(diǎn)．（2）卵母細(xì)胞的采集主要方法是：用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵．采集的卵母細(xì)胞，需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期后，才能與獲能的精子受精．
（3）動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→培養(yǎng)時(shí)，懸液中的細(xì)胞會很快貼附在瓶壁上，細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會停止分裂增殖→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
（4）圖乙中a過程利用DNA拼接技術(shù)（基因工程）獲取含有目的基因的胚胎成纖維細(xì)胞，b過程是通過動物細(xì)胞核移植技術(shù)培養(yǎng)克隆動物．
故答案為：
（1）PstI；EcoRI（位置可顛倒）；DNA連接酶；啟動子；
（2）促性腺激素；減數(shù)第二次分裂中期；
（3）接觸抑制；貼壁生長（兩者順序可顛倒）；胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）；傳代；
（4）DNA拼接技術(shù)（基因工程）；動物細(xì)胞核移植技術(shù)．

點(diǎn)評：本題結(jié)合賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆牛培育過程圖，考查基因工程和動物細(xì)胞工程技術(shù)的相關(guān)知識，意在考查考生的識圖能力和理解所學(xué)知識要點(diǎn)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識與觀點(diǎn)，對某些生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論．