Question

【題目】乙型腦炎病毒（JEV）是一種 RNA 病毒，病毒的 E 蛋白參與病毒復制過程。研究人員利用基因重組的方法構建了二種新型 JEV 疫苗：DNA 疫苗和 E 蛋白疫苗。圖示主要流程。

【1】過程①為_____；過程②所需要的酶是_____。

【2】研究發(fā)現：受體細胞為大腸桿菌或酵母菌時，所形成的 E 蛋白結構不完全相同。原因是 。

A.大腸桿菌無細胞核，酵母菌有細胞核可進行基因轉錄

B.大腸桿菌無膜結構的細胞器，無法對蛋白質進一步加工

C.兩種受體細胞在基因表達時所使用的密碼子不同

D.兩種受體細胞在基因表達時所遵循的堿基互補配對原則不同

【3】關于 DNA 疫苗的敘述，正確的是

A.分子較小，結構較穩(wěn)定B.能通過 PCR 技術增加生產量

C.能激活機體產生特異性免疫D.DNA 疫苗已廣泛用于人工免疫

如圖表示N 質粒和成功導入 E 蛋白基因的質粒 EN。為篩選含 EN 的菌落，可用含不同抗生素： 氨芐青霉素和四環(huán)素的平板培養(yǎng)基進行篩選，現得到 A、B、C 三類菌落，生長情況如表 。（‘+’代表生長，‘-’代表不生長）

平 板 菌 落	A	B	C
無抗生素	+	+	+
氨芐青霉素	+	+	-
四環(huán)素	+	-	-
氨芐青霉素+四環(huán)素	+	-	-

【4】表 中無抗生素平板培養(yǎng)基的作用是_____。另三種培養(yǎng)基屬于下列選項中的_____。

A．固體培養(yǎng)基 通用培養(yǎng)基 B．固體培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基

C．液體培養(yǎng)基 通用培養(yǎng)基 D．液體培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基

【5】據圖 和表判斷， 。

A.A 菌落細胞被導入了N 質粒B.B 菌落細胞被導入 EN 質粒

C.C 菌落細胞未被導入任何質粒span style="width:63.77pt; display:inline-block; -aw-tabstop-align:left; -aw-tabstop-pos:207.65pt">D.兩種抗生素均能抑制 E 蛋白表達

Answer 1

【答案】

【1】 逆轉錄 DNA連接酶、限制酶（限制性核酸內切酶）

【2】B

【3】ABC

【4】 對照 B

【5】ABC

【解析】

基因表達載體的基本結構包括復制原點、目的基因、標記基因、啟動子、終止子等。根據題干信息和圖形分析，P0是載體質粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標記基因，可以用檢測目的基因是否導入受體細胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質粒后悔破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr）。

【1】乙型腦炎病毒RNA經逆轉錄可得①cDNA；將E蛋白基因和P質粒連接需用②限制酶和DNA連接酶。

【2】大腸桿菌屬于原核生物，酵母菌屬于真核生物，由于大腸桿菌沒有膜結構的細胞器，無法對蛋白質進一步加工，故當受體細胞為大腸桿菌或酵母菌時，所形成的E蛋白結構不完全相同。

【3】DNA疫苗屬于基因，分子較小，結構較穩(wěn)定，能通過PCR技術增加生產量，還能通過轉錄和翻譯表達出相應的產物，引起免疫反應。

【4】P0是載體質粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標記基因，可以用檢測目的基因是否導入受體細胞，表中無抗生素平板培養(yǎng)基的作用是對照作用，另三種培養(yǎng)基屬于屬于選擇培養(yǎng)基。

【5】根據表格分析，A類菌落在氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都能夠生長，說明其導入的是N；B類菌落在氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能生長，C類菌落在任何抗生素的培養(yǎng)基中都不能生長，說明其沒有導入任何質粒，兩種質粒中含有氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr），能表達產生相應的抗生素，但E蛋白基因的表達與兩種抗生素無關。

解答本題的關鍵是識記并理解基因工程的四個基本步驟，尤其是對核心步驟-構建基因表達載體步驟的理解，明確基因表達載體的幾個必須的成分及其作用，進而結合題干要求分析答題。