Question

回答有關(guān)基因工程的問(wèn)題：
（1）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類(lèi)型的限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生

 

末端．若要在限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生

 

（相同、不同）粘性末端的限制性核酸內(nèi)切酶．
（2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，在用表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用

 

處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱(chēng)為

 

．為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成

 

，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（3）如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的

 

中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的

 

上．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專(zhuān)題：

分析：1、限制酶主要從原核生物中分離純化出來(lái)，能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種．
2、目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)； ②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)； ③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法最常用的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法（Ca²⁺處理法）．

解答： 解：（1）用不同類(lèi)型的限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生平末端．若要在限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生相同粘性末端的限制性核酸內(nèi)切酶．
（2）在用表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用Ca²⁺處理大腸桿菌，使細(xì)菌變成感受態(tài)細(xì)胞以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱(chēng)為分子雜交技術(shù)．為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成人胰島素，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（3）如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體的DNA上．
故答案為：
（1）平　          相同　
（2）Ca²⁺　     分子雜交技術(shù)　      人胰島素　
（3）T-DNA　    染色體的DNA

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)與觀點(diǎn)，通過(guò)比較、分析與綜合等方法對(duì)某些生物學(xué)問(wèn)題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或的能力．將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞．原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖速度快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少．