Question

【題目】艾滋病（AIDS）是一種危害性極大的傳染病，由感染艾滋病病毒（HIV）引起。早發(fā)現(xiàn)早治療能有效的延長(zhǎng)患者的壽命，提高患者的生活質(zhì)量，目前醫(yī)學(xué)上檢測(cè)HIV的方法主要有兩種：HIV核酸檢測(cè)、HIV抗體檢測(cè)。回答下列問(wèn)題：

（1）HIV侵染人體后，病毒RNA比抗體早出現(xiàn)約1~2周，可通過(guò)核酸檢測(cè)是否早期感染。通常是先提取疑似患者血清中的RNA通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到__________，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，此過(guò)程中使DNA解旋的方法是_____________。

（2）對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析常采用特異性探針檢測(cè)，通常采用帶有標(biāo)記的DNA________（填“單鏈”或“雙鏈”）作為探針。探針與（1）中得到的核酸雜交，若觀察到____________顯示結(jié)果為陽(yáng)性，則表明疑似患者體內(nèi)有HIV。

（3）1~2周后，用抗體檢測(cè)方法更能確診是否感染。使用該方法的前提是制備能檢測(cè)抗體的物質(zhì)，一般采用基因工程方法，先獲得HIV的特異基因，構(gòu)建表達(dá)載體，其組成包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子以及_______等，表達(dá)載體作用是____________。

（4）再將表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，從受體細(xì)胞中分離得到HIV特異基因表達(dá)的蛋白質(zhì)，可作為_________（填“抗原”或“抗體”）用于檢測(cè)疑似患者血清。

Answer 1

【答案】DNA 高溫 單鏈 雜交帶 標(biāo)記基因 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。 抗原

【解析】

1、PCR的過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)。

2、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)，個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）HIV侵染人體后，病毒RNA比抗體早出現(xiàn)約1~2周，可通過(guò)核酸檢測(cè)是否早期感染。通常是先提取疑似患者血清中的RNA通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到DNA；然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，PCR擴(kuò)增過(guò)程中高溫使DNA解旋。

（2）DNA分子雜交技術(shù)是將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來(lái)，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等做標(biāo)記，以帶有標(biāo)記的DNA的單鏈作為探針；探針與（1）中得到的核酸雜交，如果出現(xiàn)雜交帶，顯示結(jié)果為陽(yáng)性，則表明疑似患者體內(nèi)有HIV。

（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程成功的關(guān)鍵，其組成包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子以及標(biāo)記基因等；表達(dá)載體作用是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

（4）從受體細(xì)胞中分離得到HIV特異基因表達(dá)的蛋白質(zhì)作為抗原用于檢測(cè)疑似患者血清是否存在HIV抗體。