Question

2．(17分)(2012·南昌一模)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，需經(jīng)細(xì)菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，下列是從土壤中分離分解尿素細(xì)菌的有關(guān)問題，請(qǐng)分析回答：

(1)如圖是利用________法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步________到培養(yǎng)基的表面。除此方法外，常用的微生物接種方法還有________(寫一種)。

(2)如果要對(duì)培養(yǎng)的菌落進(jìn)行純化，在培養(yǎng)基上劃線操作中，操作的第一步及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是對(duì)接種環(huán)進(jìn)行________，灼燒的接種環(huán)冷卻后才能接種的原因是______________________。

(3)下面是兩種培養(yǎng)基的配方：

表1：A培養(yǎng)基配方

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	瓊脂	H2O
1.4 g	2.1 g	0.2 g	10.0 g	1.0 g	15.0 g	1 000 mL

表2：B培養(yǎng)基配方

纖維素粉	Na2HPO4·	NaNO37H2O	KH2PO4	MgSO4·7H2O	KCl	酵母粉膏	H2O
5 g	1 g	1.2 g	0.9 g	0.5 g	0.5 g	0.5 g	1 000 mL

①配制培養(yǎng)基的操作步驟________(用字母順序回答)。

a．倒平板　b．計(jì)算　c．溶化　d．稱量　e．滅菌

②通常培養(yǎng)基采用____________法滅菌，在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，應(yīng)將平板倒置，目的是________________________。

③如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)選擇上述________(A、B)配方的培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中加入________指示劑，可初步鑒定出該種細(xì)菌能否分解尿素。

④據(jù)B培養(yǎng)基的成分，所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是________。

(4)如果進(jìn)一步從尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，則每次循環(huán)復(fù)制可分為________________三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它們能合成________，該物質(zhì)被提取出后的純化方法通常是____________________________________________________。

(5)在微生物培養(yǎng)過程中，常需要對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，血球計(jì)數(shù)板是常用的工具，血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室長和寬各為1 mm，深度為0.1 mm，其中25×16型的血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室以雙線等分成25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。一般計(jì)數(shù)時(shí)選取的中方格位于計(jì)數(shù)室的____________________。下圖表示的是其中一個(gè)中方格的情況，對(duì)該中方格中的酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)的結(jié)果是________個(gè)。如果計(jì)數(shù)的幾個(gè)中方格中的細(xì)胞平均數(shù)為20個(gè)，則1 mL培養(yǎng)液中酵母菌的總數(shù)為________個(gè)。

(6)抗生素可由微生物產(chǎn)生，具有抑菌作用，能在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散。在篩選產(chǎn)生抗生素的菌種時(shí)，先在瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線接種一種從土壤中獲得的甲菌，在27 ℃下培養(yǎng)3天，形成菌落。然后接種乙、丙、丁三種致病菌(圖A)，繼續(xù)在同樣條件下培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖B。分析結(jié)果，得出的結(jié)論是(　　)

①甲菌產(chǎn)生了抗生素�、诙【�的生長被丙菌產(chǎn)生的抗生素抑制　③乙菌的生長被甲菌產(chǎn)生的抗生素抑制�、鼙�菌產(chǎn)生的抗生素抑制了乙菌的生長

A．①③　　　　　　B．①④

C．②③　　　　　　D．②④

Answer 1

答案：(1)平板劃線'稀釋(分散、分離)'稀釋涂布平板法

(2)滅菌'防止高溫殺死需接種的微生物

(3)①bdcea　②高壓蒸汽滅菌　防止培養(yǎng)皿內(nèi)壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基�、跘'酚紅'④異養(yǎng)型

(4)變性、復(fù)性、延伸'脲酶'凝膠色譜法

(5)四個(gè)角和中央的五個(gè)中方格　24　5×10⁶

(6)A

解析：(1)圖示利用平板劃線法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋到培養(yǎng)基的表面。除此方法外，常用的微生物接種方法還有稀釋涂布平板法。

(2)接種環(huán)通過灼燒滅菌，灼燒的接種環(huán)冷卻后才能接種的原因是防止高溫殺死需接種的微生物。

(3)①配制培養(yǎng)基的操作步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。②通常培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，應(yīng)將平板倒置，目的是防止培養(yǎng)皿內(nèi)壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基。③如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)選擇上述以尿素為氮源的培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，可初步鑒定出該種細(xì)菌能否分解尿素。④B培養(yǎng)基的成分中，碳源為有機(jī)物，所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型。

(4)PCR技術(shù)擴(kuò)增，則每次循環(huán)復(fù)制可分為變性、復(fù)性、延伸三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它們能合成脲酶，該物質(zhì)被提取出后的純化方法通常是凝膠色譜法。

(6)乙、丙、丁三種致病菌不會(huì)產(chǎn)生抗生素，否則靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生長。從圖B來看，乙菌的生長被抑制，最可能的原因是甲菌產(chǎn)生了抗生素，此種抗生素只能抑制乙菌的生長，而對(duì)丙、丁兩種細(xì)菌沒有影響。①③選項(xiàng)正確，答案為A。