Question

18．某同學(xué)為探究土壤中微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計了如下實驗．并通過該實驗成功篩選出了能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌）．培養(yǎng)基成分如表所示，實驗步驟如圖所示．請回答：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
瓊脂糖	15g
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到100mL

（1）制備培養(yǎng)基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、調(diào)pH、分裝、加塞、包扎、滅菌等．
（2）“目的菌”生長所需的氮源為培養(yǎng)基中的尿素．用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培養(yǎng)基的原因為防止瓊脂中氮元素對實驗的干擾．為檢測能降解尿素細(xì)菌的存在與否應(yīng)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若存在，則菌落周圍將形成紅色環(huán)帶．
（3）圖中為將細(xì)菌轉(zhuǎn)接到固體培養(yǎng)基上，應(yīng)采用涂布分離法進(jìn)行接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選．
（4）對尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是D．
A．高壓蒸汽滅菌   B．紫外燈照射    C.70%的酒精浸泡     D．過濾．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．
3、無菌技術(shù)：消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

解答 解：（1）制備培養(yǎng)基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、調(diào)pH、分裝、加塞、包扎、滅菌等．
（2）目的菌生長繁殖需要的氮源來自尿素；用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培養(yǎng)基可防止瓊脂中氮元素對實驗的干擾；分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，將尿素分解形成堿性物質(zhì)氨，在堿性環(huán)境下，酚紅指示劑變紅．
（3）圖示采用的接種方法是稀釋涂布平板法．
（4）A、由于尿素加熱會分解，A錯誤；
B、紫外燈照射只能起到消毒作用，B錯誤；
C、70%的酒精浸泡只能起到消毒作用，C錯誤；
D、由于尿素加熱會分解，對尿素溶液進(jìn)行滅菌最好用G6玻璃沙漏斗過濾，D正確．
故選：D．
故答案為：
（1）調(diào) pH
（2）尿素     防止瓊脂中氮元素對實驗的干擾      紅
（3）涂布分離
（4）D

點評 本題結(jié)合數(shù)據(jù)表格和圖解，考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的制備步驟；識記接種微生物常用的兩種方法；識記無菌技術(shù)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．