Question

【題目】神經(jīng)纖毛蛋白-1 （ NRP-1） 是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的新型受體，通過(guò)參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)促進(jìn)腫瘤血管的生成。本研究將為 NRP-1 單克隆抗體靶向治療乳腺癌提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

（1）取乳腺癌 （MCF7）組織塊，運(yùn)用_____技術(shù)獲得 MCF7 細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 用重組的人_____蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射， 使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)， 制備雜交瘤細(xì)胞，將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，吸取培養(yǎng)孔中的________（填“ 上清液”或“沉淀細(xì)胞”），進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)。經(jīng)多次篩選和細(xì)胞培養(yǎng)，獲得 NRP-1 單克隆抗體 （ NRP-1 MAb） 。

（2）將 MCF7 細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，等量注入 4 組裸鼠右前腋下，接種后 3 天開始給藥， 共給藥 7 次。每隔 5 天測(cè)算一次腫瘤的腫瘤體積，如下圖所示。

對(duì)照組注射_____，從上圖中可以看出_____。

（3）注射不同劑量 NRP-1 MAb 33 天后，剝離腫瘤組織稱重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖：

該結(jié)果表明____________________________________________________。

（4）基于以上研究，科學(xué)家們對(duì)該抗體的用藥方式有兩種觀點(diǎn)：謹(jǐn)慎用藥和適宜濃度用藥。 你支持哪個(gè)觀點(diǎn)，并說(shuō)出理由___________________________________。

Answer 1

【答案】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1） 上清液 等量的生理鹽水 NRP-1 MAb 能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高濃度抗體的降低效果比低濃度的效果更顯著 NRP-1 MAb 可以明顯降低腫瘤組織的重量，中、高濃度抗體的降低效果稍微沒有低濃 度的好，但這種差異并不顯著 ）第 1 種答案：支持謹(jǐn)慎用藥 理由：隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，中高劑量和低劑量的 NRP-1 MAb 在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上出現(xiàn)的不一致性可能會(huì)加大，應(yīng)進(jìn)行后續(xù)研究，現(xiàn)階 段謹(jǐn)慎用藥。 第 2 種答案：支持適宜濃度用藥 理由：該抗體已經(jīng)顯示了顯著的抑瘤效果，中高劑量和低 劑量的 NRP-1 MAb 在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上雖然出現(xiàn)了不一致性，但這種不一致性 很小，可以考慮適宜濃度用藥。

【解析】

動(dòng)物細(xì)胞融合，又稱細(xì)胞雜交，指將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程，融合后形成具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。
單克隆抗體制備的過(guò)程中需要經(jīng)過(guò)兩次篩選，第一次用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次用專一抗體檢測(cè)篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶進(jìn)行分散處理后，運(yùn)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得MCF7細(xì)胞。要制備NRP-1單克隆抗體，需要用重組的人NRP-1蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的漿細(xì)胞，與該漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合處理，制備雜交瘤細(xì)胞。將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，可以從培養(yǎng)液即上清液中提取到單克隆抗體，可以用抗原-抗體雜交技術(shù)進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)。經(jīng)多次篩選和細(xì)胞培養(yǎng)，獲得NRP-1單克隆抗體（NRP-1 MAb）。

（2）實(shí)驗(yàn)的自變量是給藥的劑量和時(shí)間，因變量是腫瘤的體積，對(duì)照組應(yīng)該注射等量的生理鹽水，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，NRP-1 MAb 能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高濃度抗體的降低效果比低濃度的效果更顯著。

（3）注射不同劑量NRP-1 MAb 33天后，剝離腫瘤組織稱重，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，NRP-1 MAb 可以明顯降低腫瘤組織的重量，中、高濃度抗體的降低效果稍微沒有低濃度的好，但這種差異并不顯著。

（4）支持謹(jǐn)慎用藥理由 ：隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，中高劑量和低劑量的 NRP-1 MAb 在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上出現(xiàn)的不一致性可能會(huì)加大，應(yīng)進(jìn)行后續(xù)研究，現(xiàn)階段謹(jǐn)慎用藥。

支持適宜濃度用藥 理由：該抗體已經(jīng)顯示了顯著的抑瘤效果，中高劑量和低劑量的 NRP-1 MAb 在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上雖然出現(xiàn)了不一致性，但這種不一致性很小，可以考慮適宜濃度用藥。