【題目】(一)純化分離細菌的一般步驟如下圖所示:

(1)若分離以尿素為氮源的菌種,培養(yǎng)基中通常加入的凝固劑是_____,用于尿素溶液滅菌的工具是_____。若要對分離的菌種進行計數(shù),步驟X是______方法。

(2)若分離醋化醋桿菌得到如圖所示的結(jié)果,那么步驟X需在_____條件下,用______(工具)完成接種。

(3)為了增加純化分離的醋化醋桿數(shù)量,需要對其進行______,獲得的菌種可用于制作果醋,將菌種以_______法固定在木屑上,有利于醋酸發(fā)酵的進行。

(二)細胞內(nèi)核苷酸的形成途徑有兩種。途徑1:利用磷酸、核糖、氨基酸、CO2和NH3等化合物合成。途徑2:利用次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成。氨基蝶呤可阻斷途徑1。正常的脾細胞核苷酸合成的兩條途徑都存在,但在培養(yǎng)基中僅存活5~7天,實驗所用的骨髓瘤細胞是途徑2缺陷型細胞。請回答:

(1)用于制備單克隆抗體的脾細胞是從經(jīng)過______的小鼠體內(nèi)獲得,與篩選出的小鼠骨髓瘤細胞用______處理誘導(dǎo)融合。

(2)經(jīng)誘導(dǎo)后,考慮細胞兩兩融合有3種類型,為了篩選出雜交瘤細胞,需在培養(yǎng)基中加入的特殊物質(zhì)有____,然后培養(yǎng)____天以上,從而達到篩選目的。篩選出的雜交瘤細胞具有_____特點。

(3)篩選出陽性雜交瘤細胞進行兩次克隆培養(yǎng),為提高細胞克隆的形成率,應(yīng)在培養(yǎng)中加入用射線照射失去_____能力的小鼠成纖維細胞以支持生長。

(4)克隆形成的符合要求的雜交瘤細胞,在小鼠體內(nèi)或體外培養(yǎng),可獲得抗體。經(jīng)純化后的抗體應(yīng)在 _____條件下保存,使其較長時間內(nèi)保持活性。

【答案】瓊脂糖 G6玻璃砂漏斗 涂布分離 無菌 接種環(huán) 擴大培養(yǎng) 吸附 免疫 (滅活的)仙臺病毒或聚乙二醇或低壓交流電場 次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤 7 既能無限增殖又能產(chǎn)生抗體 增殖 4℃或低溫

【解析】

培養(yǎng)基按物理性質(zhì)分可分固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基,常用的凝固劑是瓊脂或瓊脂糖,分離以尿素為唯一氮源的微生物時應(yīng)以瓊脂糖為凝固劑,因為瓊脂是混合物,含有N。微生物常用接種方法有平板劃線法和稀釋涂布分離法,其中平板劃線法更易獲得單菌落,稀釋涂布分離法適合用于微生物計數(shù)。動物細胞融合的主要應(yīng)用是制備單克隆抗體,單克隆抗體制備過程中,骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導(dǎo)融合后,要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。正常的脾細胞核苷酸合成的兩條途徑都存在但不能無限增殖,僅存活5~7天,且途徑1可被氨基蝶呤阻斷,骨髓瘤細胞是途徑2缺陷型細胞即能利用次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸,在特定培養(yǎng)基上要選擇保留雜交瘤細胞,則培養(yǎng)基中要加入次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤,以阻斷途徑1,據(jù)此分析。

(一)(1)若分離以尿素為氮源的菌種,應(yīng)配置以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基,因此培養(yǎng)基中通常加入的凝固劑是瓊脂糖,用于尿素溶液滅菌的工具是G6玻璃砂漏斗。若要對分離的菌種進行計數(shù),步驟X是稀釋涂布分離法。

(2)若分離醋化醋桿菌得到如右圖所示的結(jié)果,那么步驟X需在無菌條件下,用接種環(huán)完成接種。

(3)為了增加純化分離的醋化醋桿數(shù)量,需要對其進行擴大培養(yǎng),獲得的菌種可用于制作果醋,將菌種以吸附法固定在木屑上,有利于醋酸發(fā)酵的進行。

(二)(1)用于制備單克隆抗體的脾細胞是從經(jīng)過免疫的小鼠體內(nèi)獲得,與篩選出的小鼠骨髓瘤細胞用(滅活的)仙臺病毒或聚乙二醇或電刺激處理誘導(dǎo)融合。

(2)經(jīng)誘導(dǎo)后,考慮細胞兩兩融合有3種類型,為了篩選出雜交瘤細胞,需在培養(yǎng)基中加入的特殊物質(zhì)有次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤,然后培養(yǎng)7天以上,從而達到篩選目的。篩選出的雜交瘤細胞具有既能無限增殖又能產(chǎn)生抗體特點。

(3)篩選出陽性雜交瘤細胞進行兩次克隆培養(yǎng),為提高細胞克隆的形成率,應(yīng)在培養(yǎng)中加入用射線照射失去增殖能力的小鼠成纖維細胞以支持生長。

(4)克隆形成的符合要求的雜交瘤細胞,在小鼠體內(nèi)或體外培養(yǎng),可獲得抗體。經(jīng)純化后的抗體應(yīng)在4℃或低溫條件下保存,使其較長時間內(nèi)保持活性。

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(3)圖中的C表示甲種群用于_____的能量,其中④的能量值為_____kJ。

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B. 4、Ⅱ5、Ⅲ1 均攜帶相關(guān)致病基因

C. 5、Ⅲ1均不攜帶相關(guān)致病基因

D. 4、Ⅱ5 攜帶白化病基因、Ⅲ1 不攜帶白化病基因

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