Question

【題目】根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題

（1）在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外，還有______________________________等；真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行_______________的。

（2）構(gòu)建基因文庫時(shí)，將含有某種生物不同基因的DNA片段，導(dǎo)入_____________中儲(chǔ)存。與基因組文庫相比，cDNA文庫含有的基因數(shù)目少，原因是________________________。

（3）體外快速擴(kuò)增目的基因，常采用_________技術(shù)，該技術(shù)的原理為___________________。

（4）基因工程中的轉(zhuǎn)化是指_______________________________________________________的過程。檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的__________進(jìn)行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已成功表達(dá)，形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

Answer 1

【答案】λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等 人工改造 受體菌的群體 cDNA 文庫中只含有已表達(dá)的基因，而基因組文庫中含有生物的全部基因 PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)） DNA雙鏈復(fù)制 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá) 抗體

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外，還有λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。在進(jìn)行基因工程操作中，真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的。

（2）重組載體導(dǎo)入到受體菌的群體中儲(chǔ)存，基因組文庫構(gòu)建完成。cDNA文庫只能收集到生物發(fā)育到某時(shí)期己發(fā)生轉(zhuǎn)錄的基因，而基因組文庫能收集到全部基因，因此與基因組文庫相比，cDNA文庫的基因數(shù)相對(duì)要少。

（3）在體外快速大量獲得目的基因可以采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制。

（4）基因工程的轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已成功表達(dá)，形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。