Question

11． Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中所選的卵母細(xì)胞應(yīng)處于減數(shù)第二次分裂中（MⅡ中）期．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞，ES細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯的特點．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）．可以根據(jù)Rag₂基因的核苷酸序列設(shè)計合成引物，利用PCR技術(shù)擴增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在目的基因所在DNA片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點．
（4）為檢測Rag₂基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag₂蛋白的抗抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．

解答 解：（1）步驟①核移植中所選的卵母細(xì)胞應(yīng)處于減數(shù)第二次分裂中期．
（2）胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）．故步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞，ES細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯的特點．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的表達(dá)載體；設(shè)計引物要遵循堿基互補配對原則，所以根據(jù)Rag₂基因的核苷酸序列進(jìn)行設(shè)計；利用PCR技術(shù)可在體外大量擴增目的基因；Rag₂基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割獲得的，所以表達(dá)載體應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位點．
（4）基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，所以提取小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）減數(shù)第二次分裂中（MⅡ中）
（2）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)    細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯
（3）表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）    引物     PCR　  HindⅢ和PstⅠ
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題結(jié)合圖解，綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問題；識記核移植的具體過程；識記體外受精的具體過程及早期胚胎發(fā)育的過程，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．