Question

10．科學(xué)家將人的生長激素基因與pBR322質(zhì)粒進行重組，導(dǎo)入大腸桿菌中并成功地得以表達．pBR322質(zhì)粒含有兩個抗生素抗性基因和5個限制酶切點（如圖2）．請據(jù)圖回答問題：

（1）圖1中①過程獲取單鏈DNA的方法是反轉(zhuǎn)錄法．
（2）將目的基因插入到pBR322質(zhì)粒中，用到的兩種工具酶分別是限制酶和DNA連接酶．
（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的方法是首先用鈣離子處理大腸桿菌，使細胞處于感受態(tài)，再將重組質(zhì)粒與感受態(tài)大腸桿菌混合，在一定條件下完成轉(zhuǎn)化．
（4）重組質(zhì)粒形成與否需要鑒定和篩選，方法是將導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，通過含抗生素的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，觀察大腸桿菌的生長、繁殖情況進行判斷，如圖3所示．如果受體菌在培養(yǎng)基A上能生長、繁殖形成菌落，而不能在培養(yǎng)基B上生長、繁殖，則使用限制酶的切點是圖2中的切點3或切點4或切點5，即目的基因插入了抗四環(huán)素基因中．

Answer 1

分析 由圖可知，①是逆轉(zhuǎn)錄，②是獲取目的基因，切點1可破壞抗氨芐青霉素基因，切點3、4、5可破壞抗四環(huán)素基因，切點2對這兩個基因無影響．

解答 解：（1）圖1中①過程表示逆轉(zhuǎn)錄，即獲取單鏈DNA的方法為反轉(zhuǎn)錄法．
（2）將目的基因插入到運載體中，用到的兩種工具酶為限制酶和DNA連接酶．
（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的方法是首先用鈣離子處理大腸桿菌，使細胞處于感受態(tài)，再將重組質(zhì)粒與感受態(tài)大腸桿菌混合，在一定條件下完成轉(zhuǎn)化．
（4）根據(jù)題意，受體菌能在含青霉素的培養(yǎng)基上生存，不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生存，所以限制酶切點位于四環(huán)素基因內(nèi)部，由圖可知，是切點3、4、5．
故答案為：
（1）反轉(zhuǎn)錄
（2）限制酶      DNA連接酶
（3）鈣離子
（4）切點3或切點4或切點5       抗四環(huán)素

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、工具及操作步驟，掌握目的基因獲取的方法，再結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．