Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圈l、圈2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

（1）一個圖1所示的質粒分子經(jīng)EcoR I切割前、后，分別含有_____個游離的磷酸基團。

（2）用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是______。

（3）為了獲取重組質粒，將切割后的質粒與目的基因片段混合，并加入______酶。該步驟是基因操作的核心，稱為_____________，其目的是________________。

（4）重組質粒中抗生素抗性基因的作用是為了_______。

（5）生產(chǎn)上常用大腸桿菌等微生物作為受體細胞，原因是易培養(yǎng)、繁殖快、多為單細胞、_______。

Answer 1

【答案】0、2SmaⅠ會破壞質粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因DNA連接構建基因表達載體使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳，使目的基因在受體細胞表達并發(fā)揮作用鑒別和篩選含有目的基因的細胞遺傳物質少

【解析】

分析圖1：外源DNA上含有BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四種限制酶的識別序列和切割位點，其中SmaⅠ的切割序列位于目的基因上。
分析圖2：質粒上BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四種限制酶的識別序列和切割位點，其中SmaⅠ的切割位點位于抗生素抗性基因上。

（1）質粒是環(huán)狀DNA分子，不含游離的磷酸基團；質粒分子經(jīng)EcoR I切割,為DNA雙鏈，雙鏈DNA分子的每一條鏈都含有一個游離的磷酸基團，因此共含有2個游離的磷酸基團。

（2）質�？股�素抗性基因為標記基因，由圖可知，標記基因和外源DNA目的基因中均含有SmaI酶切位點，都可以被SmaI酶破環(huán)，故不能使用該酶剪切質粒和含有目的基因的DNA。
（3）為了使目的基因和質粒之間的磷酸二脂鍵相連，需要用DNA連接酶相連接。
（4）抗生素抗性基因是一種抗性基因，抗性基因是為了鑒別和篩選目的基因是否導入到受體細胞內。該步驟是基因操作的核心，稱為構建基因表達載體，其目的是鑒別和篩選含有目的基因的細胞。

（5）目的基因導入受體細胞后，隨著受體細胞的繁殖而復制，由于細菌等微生物結構簡單、操作方便，遺傳物質含量少，繁殖速度非�？�、且多為單細胞，因此在基因工程技術中，科學家常用細菌、酵母菌等微生物作為受體細胞，這樣能在很短的時間內就能獲得大量的目的基因。