Question

1975年英國(guó)科學(xué)家Milestein和Kohler開創(chuàng)了將產(chǎn)生抗體的單個(gè)細(xì)胞同瘤細(xì)胞融合的技術(shù)，解決了在體外培養(yǎng)并獲得大量純一的單克隆抗體的難題．如圖一所示．閱讀下列資料，并回答有關(guān)問題：
資料一：B淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下，不能無(wú)限大量增殖，故在培養(yǎng)條件下不能存活．瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下可以無(wú)限傳代，是“永生”的細(xì)胞．
資料二：細(xì)胞合成DNA有“主要合成途徑”和“應(yīng)急途徑”（如圖二所示）．當(dāng)“主要合成途徑”被阻斷時(shí)，具有次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的細(xì)胞在主要合成途徑被阻斷時(shí)，可通過應(yīng)急途徑合成DNA，即細(xì)胞可利用次黃嘌呤合成嘌呤核苷酸，利用胸腺嘧啶核苷合成嘧啶核苷酸，從而繼續(xù)合成DNA．骨髓瘤細(xì)胞具有正常型和具有次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶缺陷型（HGPRT-）和胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-），即該細(xì)胞不具有HGPRT和TK．
資料三：HAT培養(yǎng)基由次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷三種成分組成，簡(jiǎn)稱HAT．氨基喋呤有阻斷DNA主要合成途徑的作用．

（1）獲取小鼠脾細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞）前，需向小鼠腹腔內(nèi)注射

 

．旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞選用

 

（正常型/缺陷型）．將脾細(xì)胞懸液與瘤細(xì)胞混合，離心去掉上清液．迅速向細(xì)胞沉淀物中加入

 

促融，靜置1分鐘，加稀釋液終止其促融作用．
（2）①中加入

 

．其作用是

 

．其中，脾細(xì)胞不能存活，因?yàn)?div id="4dxc7m9" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

；骨髓瘤細(xì)胞也不能存活，因?yàn)?div id="i8mrwjh" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

Answer 1

考點(diǎn)：單克隆抗體的制備過程

專題：

分析：1．制備單克隆抗體的誘導(dǎo)過程有：正常小鼠免疫處理、動(dòng)物細(xì)胞的融合（物、化、生法）、雜交瘤細(xì)胞的篩選與培養(yǎng)、專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞培養(yǎng)、單克隆抗體的提純．
2．單克隆抗體：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體．
3．三次篩選：①篩選能夠產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞②篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）③篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群．
4．雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體．
5．分析題圖：制備單克隆抗體的方法是用缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤細(xì)胞變異株與脾臟的B細(xì)胞融合．采用HAT選擇性培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中加次黃嘌呤、氨基喋呤、及胸腺嘧啶核苷），在這種選擇性培養(yǎng)基中，由于變異的瘤細(xì)胞不具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA．而只能利用糖與氨基酸合成DNA，這一途徑又被氨基喋呤所阻斷，所以未融合的瘤細(xì)胞不可避免也要死亡．融合的雜交瘤細(xì)胞由于脾淋巴細(xì)胞具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶，可以通過次黃嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻斷，因此雜交瘤細(xì)胞大量繁殖而被篩選出來．

解答： 解：（1）要制備單克隆抗體，正常小鼠免疫處理，需向小鼠腹腔內(nèi)注射抗原，培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞選用缺陷型，將脾細(xì)胞懸液與瘤細(xì)胞混合，離心去掉上清液．迅速向細(xì)胞沉淀物中加入滅活的病毒促融，靜置1分鐘，加稀釋液終止其促融作用．
（2）①培養(yǎng)基中加入次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷，其作用是阻斷DNA主要合成途徑，保留合成DNA的應(yīng)急途徑．其中，脾細(xì)胞不能存活，因?yàn)槠⒓?xì)胞在體外培養(yǎng)條件下，不能無(wú)限大量增殖，故在培養(yǎng)條件下不能存活，骨髓瘤細(xì)胞也不能存活，因?yàn)槿诤系碾s交瘤細(xì)胞由于脾淋巴細(xì)胞具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶，可以通過次黃嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻斷，因此雜交瘤細(xì)胞大量繁殖而被篩選出來．
（3）過程②需檢測(cè)特異性抗體，篩選出X重復(fù)克�。甕是單克隆抗體．
（4）雜交瘤細(xì)胞也可將T淋巴性的淋巴瘤或胸腺瘤同T淋巴細(xì)胞融合，產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞雜交瘤，分泌均一的淋巴因子．
故答案為：
（1）抗原   缺陷型     滅活的病毒
（2）次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷    阻斷DNA主要合成途徑，保留合成DNA的應(yīng)急途徑
脾細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下，不能無(wú)限大量增殖，故在培養(yǎng)條件下不能存活
由于變異的瘤細(xì)胞不具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA．而只能利用糖與氨基酸合成DNA，這一途徑又被氨基喋呤所阻斷，所以未融合的瘤細(xì)胞不可避免也要死亡．
融合的雜交瘤細(xì)胞由于脾淋巴細(xì)胞具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶，可以通過次黃嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻斷，因此雜交瘤細(xì)胞大量繁殖而被篩選出來．
（3）特異性抗體   單克隆抗體
（4）淋巴因子

點(diǎn)評(píng)：本題考查了制備單克隆抗體及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)內(nèi)容，要求學(xué)生熟記具體流程、原理、篩選目的、單克隆抗體的特點(diǎn)和應(yīng)用．