Question

【題目】尿素中所含的氮素需經(jīng)分解尿素的細(xì)菌分解轉(zhuǎn)化為銨態(tài)氮后，才能被植物吸收。尿素小球菌是土壤中常見的高效分解尿素的細(xì)菌之一。研究人員欲從土壤中分離出尿素小球菌，進(jìn)行了一系列操作�；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題。

（1）尋找目的菌株掌握的原則是____________________________________。

（2）配制分離尿素小球菌的培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基中添加適量的KH2PO4與Na2HPO4，其作用有_____________、______________。培養(yǎng)基中的瓊脂屬于多糖類物質(zhì)，但是它并不能為尿素小球菌提供碳源，原因是______________。

（3）對(duì)采集的土壤樣品進(jìn)行稀釋后，一般選用稀釋倍數(shù)為______________的三種稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，從中選出菌落數(shù)在______________間的平板計(jì)數(shù)。

（4）對(duì)分離得到的尿素小球菌作進(jìn)一步鑒定時(shí)，可在上述培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅的原因是____________________________，再結(jié)合菌落的特征等進(jìn)行確定。

Answer 1

【答案】根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找 為細(xì)菌提供無機(jī)鹽 保持培養(yǎng)基pH的相對(duì)穩(wěn)定 尿素小球菌細(xì)胞中缺乏分解瓊脂的酶 104、105和106 30~300 尿素小球菌合成的脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，進(jìn)而使酚紅指示劑變紅

【解析】

（1）自然界中目的菌株的篩選：

①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。
②實(shí)例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的。

（2）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選：

①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度．pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。

培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。

②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。

（1）尋找目的菌株掌握的原則是根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。

（2）配制分離能分解尿素的小球菌培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基中添加適量的KH2PO4與Na2HPO4，其作用有：為細(xì)菌提供無機(jī)鹽、保持培養(yǎng)基pH的相對(duì)穩(wěn)定。由于尿素小球菌細(xì)胞中缺乏分解瓊脂的酶，所以培養(yǎng)基中的瓊脂雖屬于多糖類物質(zhì)，但是它并不能為尿素小球菌提供碳源。

（3）在土壤中，細(xì)菌的數(shù)量比真菌的多，所以為了確保稀釋后能形成菌落數(shù)在30-300之間的培養(yǎng)皿，細(xì)菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，并從中選出菌落數(shù)在30~300間的平板計(jì)數(shù)。

（4）對(duì)分離得到的尿素小球菌作進(jìn)一步鑒定時(shí)，可在上述培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，由于尿素小球菌合成的脲酶能將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，進(jìn)而使酚紅指示劑變紅。