Question

白細(xì)胞介素是一類淋巴因子．研究人員將人的白細(xì)胞介素的基因?qū)�入到酵母�?xì)胞中，使其分泌出有活性的人白細(xì)胞介素．

（1）在體液免疫過(guò)程中，白細(xì)胞介素是由

 

細(xì)胞分泌的，可作用于受到抗原刺激的B細(xì)胞，使B細(xì)胞增殖，分化、形成

 

細(xì)胞．
（2）目的基因獲取：從健康人體外周靜脈血分離得到淋巴細(xì)胞，于37°培養(yǎng)48h，提取細(xì)胞總RNA，生成eDNA．根據(jù)已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通過(guò)PCR擴(kuò)增獲取目的基因，此時(shí)需要加入的反應(yīng)物與生成cDNA時(shí)所加反應(yīng)物不同的是

 

．
（3）重組載體的構(gòu)建：用兩種限制酶EcoR1與EcoR52處理載體和目的基因后，用

 

酶處理，形成重組載體．該載體與細(xì)胞膜上載體的化學(xué)本質(zhì)分別是

 

和

 

．
（4）將重組載體導(dǎo)入酵母細(xì)胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后，收集菌液離心取

 

（上清液/菌體）進(jìn)行產(chǎn)物鑒定．若要統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)液中酵母菌的活菌數(shù)目，常用的方法是

 

．
（5）利用純化的產(chǎn)物進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，可研究人白細(xì)胞介素對(duì)于

 

的作用．

Answer 1

考點(diǎn)：人體免疫系統(tǒng)在維持穩(wěn)態(tài)中的作用,微生物的分離和培養(yǎng),基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的切割位點(diǎn)，所以切割載體和目的基因時(shí)用限制酶EcoRⅠ與EcoR52，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組載體．

解答： 解：（1）白細(xì)胞介素是一種淋巴因子，在體液免疫過(guò)程中，是由T細(xì)胞分泌的；B細(xì)胞能增殖、分化形成漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞．
（2）以RNA為模板合成cDNA稱為逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄），該過(guò)程需要模板（RNA）、酶（逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）和能量．采用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲取目的基因時(shí)需要模板（cDNA）、酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）、引物．因此，根據(jù)已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通過(guò)PCR擴(kuò)增獲取目的基因，此時(shí)需要加入的反應(yīng)物與生成cDNA時(shí)所加反應(yīng)物不同的是：模板cDNA、耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物．
（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需先用兩種限制酶EcoR1與EcoR52處理載體和目的基因后，再用DNA連接酶處理，形成重組載體．該載體的化學(xué)本質(zhì)是DNA，而細(xì)胞膜上載體的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)．
（4）將導(dǎo)入重組載體的酵母細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后，收集菌液進(jìn)行離心，應(yīng)取上清液進(jìn)行產(chǎn)物鑒定（白細(xì)胞介素屬于分泌蛋白）．若要統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)液中酵母菌的數(shù)目可采用抽樣檢測(cè)法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的是活菌數(shù)目．
（5）白細(xì)胞介素可治療癌癥，因此可推知白細(xì)胞介素可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖．因此利用純化的產(chǎn)物進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，可研究人白細(xì)胞介素抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用．
故答案為：
（1）T   漿細(xì)胞和記憶
（2）模板cDNA、耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物
（3）DNA連接   DNA   蛋白質(zhì)
（4）上清液   稀釋涂布平板法
（5）促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖（抑制腫瘤細(xì)胞增殖）

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖解，綜合考查免疫、基因工程、PCR技術(shù)、微生物的培養(yǎng)和分離等知識(shí)，要求考生識(shí)記人體免疫細(xì)胞的組成及特異性免疫過(guò)程；識(shí)記基因工程的工具及操作步驟；掌握純合微生物的方法，能運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)答題．